2017整理B淋巴细胞荧光标.ppt

B淋巴细胞荧光标记试验 2011级麻醉免疫学实验 组员： 学号： 艾仕青 1110550127 马 松 1110550128 黄科胜 1110550129 廖成群 1110550130 李 倩 1110650126 廖 莉 1120550101 马艳南 1120550102 实验目的 1、掌握免疫荧光标记技术直接法的原理和操作方法； 2、熟悉荧光显微镜的使用方法。 实验原理 B淋巴细胞表面携带的mIg，能与相应的特异性抗体结合，故可用荧光标记的抗Ig血清进行免疫荧光染色镜检。由于B细胞在分化过程中的每个阶段均具有mIg的标记 ，故该法可检出全部B淋巴细胞。每一个B淋巴细胞表面可携带不同类的Ig,分别用荧光标记的抗Ig单克隆抗体染色，则可鉴别带不同类Ig的B淋巴细胞。能与荧光标记体结合的细胞，在荧光显微镜下细胞膜可呈现荧光，即为mlg阳性细胞，也就是B淋巴细胞。同时用普通光源照明，计数该视野的淋巴细胞总数，根据发荧光和不发荧光细胞的计数，可算出B细胞的百分数。 实验材料 1、制作好的淋巴细胞抗原片 2、 PBS溶液 3、 FITC标记的羊抗人IgM 4、 37℃恒温箱、滴管、荧光显微镜、 镊子 操作步骤 1、细胞片自低温取出后至室温平衡5min，然后滴加荧光抗体（抗人IgM-FITC）1滴，置湿盒，37℃恒温箱内保温30~60min 2、取出细胞片，以0.01mol/LpH7.4的PBS溶液洗涤3次，冷风吹干后置荧光显微镜下观察 * * *