大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录.pdf

维普资讯 山西医科大学学报 (JShanxiMedU… 2 鱼生 ：三21 · 341 · 文章编号： 1007—6611(2006)04—0341—03 大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录 张 宇， 高秀萍， 李建国，郑肇青， 张 策 (山西医科大学神经生物学研究室，太原 030001) 摘要： 目的 探讨记录全细胞的大电导钙激活钾通道的技术方法。 方法 首先酶解急性分离大鼠海马神经元；利用全细 胞膜片钳技术记录大电导钙激活钾电流。 结果 可记录到一系列快速的外向钾离子电流。 结论 所记录到的外向钾离 子电流中，快速出现并很快减小的呈尖峰样的瞬变外向电流主要由大电导的钙激活钾电流组成。 关键词：大电导钙激活钾通道； 细胞分离；全细胞膜片钳 ；神经元 中图分类号：R338．2 文献标识码：A Large-conductanceCa2-activatedK currentsinrathippocampalCA1neuron$recordedbywholecellclamptechnique ~r-LANGYu．GAOXiu-ping，LIJian-guo，etal(DeptofNeurobiology，ShanxiMedicalUniversity， iyuan030001，China) Abstract： Objective Toexploreamethodforthewholecurrentsrecordofalarge-conductanceCa2一activatedK currentsinrat hippocampalCA1neurons． Methods AfterratshippocampalCA1neuronswreeisolatde byprotease，thelrage-conductanceCaz 一 activatde K culTrentswererecordedinrats hippocarnpalneuronsbywholecellclampingtechnique． Results Averystrong out— wradcurrentsappeared． Conclusion Theoutwardcurre-nts raecomposed0ftransientoutwradcurrentswithmultiplecompounds wererecordedandsustainde outwradcurrents．AndCa2一activatde K channelsmediateamajorpartofthetransientoutwrad． Keywords： lrage—ocnductanceCa2一activatedK currents； cellseparation； wholecellclma ptechnique； neurons 钾离子通道是一组类型最多、变异复杂的离子 126，KC15，CaC122，MgSO42，N~ CO325，Nr,-I2PO4 通道蛋白。钾离子通道，尤其是在神经元和肌肉细 1．5，葡萄糖10，用NaOH将pH调至7．4，温度保持 胞上的钾离子通道在膜电位的维持和恢复过程中 在32℃，在此条件下脑片可存活8—10h。将孵育 发挥重要作用。大电导钙激活钾通道(BK通道)是 好的海马脑片用细针头分离出CAI区，并切成2— 一 种重要的钾通道，广泛分布于可兴奋组织，包括 4片放人含protease(0．5g／L，Sigma)的细胞外液试 神经系统。该通道属电压依赖型通道，它的开放不 管中进行酶解，上方通以02，温度32℃，酶解 25 仅受膜电位的控制，而且还高度依赖胞内钙离子的 min。细胞外液成分为 (mmol／L)：NaC1130，KC1 浓度l1．2]。在膜发生去极化及 [Ca2]；升高的条件 5．4，CaC121，MgC121，葡萄糖 25，HEPES10，用 下被激活，通道开放后呈现较大的K 电导，在动作 NaOH将pH调至7．4，通02饱和。把酶解好的海 电位的复极过程发