细胞凋亡检测Annexin-V-FITC单染法AssayofCellApoptosis.doc

细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)(Assay of Cell Apoptosis) 2010-05-25 20:06:41 来源： HYPERLINK 易生物实验 浏览次数：197  HYPERLINK /comment/?keyid=phpcms-content-title-6111verify=fb76233f4de1a8d9b58eda773579b74f 网友评论 0 条 细胞凋亡或称程序性细胞死亡（Programmed?Cell?Death?,PCD）是细胞的生命现象之一，它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关，自身免疫性疾病和肿瘤与细胞凋亡的抑制有关。细胞凋亡有别于细胞坏死，它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变，包括出现染色质浓缩、DNA降解、凋亡小体形成等。 关键词： HYPERLINK /tag.php?tag=%CF%B8%B0%FB 细胞 HYPERLINK /tag.php?tag=%BC%EC%B2%E2 检测 HYPERLINK /tag.php?tag=%B5%A5%C8%BE%B7%A8 单染法 HYPERLINK /tag.php?tag=%CF%B8%B0%FB%B5%F2%CD%F6%BC%EC%B2%E2 细胞凋亡检测 HYPERLINK /tag.php?tag=Annexin-V-FITC Annexin-V-FITC HYPERLINK /tag.php?tag=Assay Assay HYPERLINK /tag.php?tag=Cell Cell HYPERLINK /tag.php?tag=Apoptosis Apoptosis 一、实验原理细胞凋亡或称程序性细胞死亡（Programmed Cell Death ,PCD）是细胞的生命现象之一，它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关，自身免疫性疾病和肿瘤与细胞凋亡的抑制有关。细胞凋亡有别于细胞坏死，它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变，包括出现染色质浓缩、DNA降解、凋亡小体形成等。在正常的活细胞，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine， PS）位于细胞膜的内侧，但在凋亡的细胞，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。因此将Annexin-Ⅴ进行荧光素（如FITC、PE）或生物素（Biotin）标记，以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针，利用 HYPERLINK /yp/product-list-139.html \t _blank 流式细胞仪或 HYPERLINK /yp/product-list-215.html \t _blank 荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。二、实验仪器和材料Annexin V-FITC（膜联蛋白-V-FITC） 500μl/250μl 20μg/ml标记缓冲液（Binding Buffe）r 40/20 mlPBS（1×） 60/30 ml20μl , 200μl , and 1000μl  HYPERLINK /yp/product-list-65.html \t _blank 移液器和 HYPERLINK /yp/product-list-925.html \t _blank 吸头微量 HYPERLINK /yp/product-list-954.html \t _blank 离心管可调速 HYPERLINK /yp/product-list-47.html \t _blank 离心机载玻片（用于 HYPERLINK /yp/product-list-215.html \t _blank 荧光显微镜观察）盖玻片（用于 HYPERLINK /yp/product-list-215.html \t _blank 荧光显微镜观察）去离子水冰块 HYPERLINK /yp/product-list-139.html \t _blank 流式细胞仪或荧光显微镜三、实验方法1．凋亡细胞的制备：小鼠腹腔注射地塞米松25mg/kg体重，10h后解剖取胸腺，分离胸腺细胞。用PBS洗两遍，调整待测细胞的浓度为2 ×106/ml，备用。2．200μl细胞悬液加