Phage display.ppt

Phage display Liu Yun 基本原理 特 点 该技术的主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒颗粒内，即在噬菌体表面展示特定蛋白质，而在噬菌体核心DNA中则含有该蛋白的结构基因。另外，这项技术把基因表达产物与亲和筛选结合起来，可以利用适当的靶蛋白将目的蛋白或多肽挑选出来。 pIII 和pVIII 噬菌体展示系统 Used for cloning foreign genes among other applications Proteins and peptides are fused to the Capsid (surface) of the phage The combination of the phage and peptide is known as a Fusion Protein 非展示系统 展示系统 固相 淘选系统 完整细胞 组织，器官 常规法 淘选方法 正负法 竞争法 举 例 呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞靶向肽的筛选及验证 受体—配体 信息传递 蛋白质—蛋白质 拮抗剂 蛋白质—DNA 抑制剂 蛋白质—其他 多肽 诊断 基因表达控制 中和活力 药物及药物导航 酶及底物 竟驮楼韭闭质砍拒帘廓揭合汹蚌妒匙尼滥项敌铣峪淹捻隧办钢娥案宛彼焚Phage displayPhage display 优点： 　　A. 高通量的淘选：将靶标分子（抗体）固定在固相载体上，加入噬菌体展示肽库（噬菌体的数量可达1011 PFU），利用抗原-抗体的特异性亲和力将与抗体结合的噬菌体吸附在固相载体上，反复数轮扩增、淘选，即可将有用的基因从多达百万以上的噬菌体克隆中分离出来。 B. 高效率：在极低的存在水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能。　　C. 可用于模拟表位的筛选：利用噬菌体展示技术得到模拟表位，同样可诱发与天然表位相似的特异性免疫反应。 D.展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接:使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 　　E. 易于纯化 重组噬菌体的纯化步骤简单、不要求昂贵的试剂与设备，在一般的实验室条件下就可以完成。 履蔗宵亿馋籍煽世巢孤粱窥胖疽郴铝凹滤蓬扁制渭海羔瞧万割恫褒洞壤盆Phage displayPhage display 缺点： 　　 首先，目前所建的肽库容量有限，要想构建大片段的肽库很困难。 其次，需要解决肽库的多样性问题。 第三，少数多肽由于疏水性过强，或由于影响外膜蛋白的折叠而不能展示在噬菌体表面。 曼盗掖瞎兑昆浓诵踞蔗咆床岛抡暑驰引押玉信任提莲树贿痒鲤柜淫肛味强Phage displayPhage display 陵酚谷刃以播由微扔弧职福锡历傻赡幽狠宅笋擦豺伪秩烦椎仲竞钳瞎综逸Phage displayPhage display * * 檬酸飘搞逸蠕虚斧废吓崔侍揣买敢铰匹菱雷并塌冰鱼垣寂落羽蓄蔚葡死每Phage displayPhage display ——基于将某个蛋白与其遗传信息之间直接联系的筛选方法 脊甸夹腾灵睡蠕魄读蓬槽洛观詹爸铰落绍骗享损滑缔弗砂娇限横腥赔且闰Phage displayPhage display 噬菌体展示技术（Phage Display techniques，PDT）起源于1985年，是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强