SC_T 7218.1-2015指环虫病诊断规程 第1部分：小鞘指环虫病.pdf

ICS 65.020.30B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7218.1—2015指环虫病诊断规程第1部分：小鞘指环虫病Protocols for diagnosis of Dactylogyriasis--Part 1 : Infection with Dactylogyrus vaginulatus2015-02-09 发布2015-05-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7218. 1--2015前言SC/T 7218《指环虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：小鞘指环虫病；一一第2部分：页形指环虫病；-第 3 部分:指环虫病;一第4部分：坏鳃指环虫病；业本部分是《指环虫病诊断规程》的第1部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业渔政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：河北省水产养殖病害防治监测总站。本部分主要起草人：曹杰英、张志华、刘文青、李全振、李凤超、康现江、赵宝华、申红旗、侯金良。1 SC/T 7218. 1--2015指环虫病诊断规程第1部分：小鞘指环虫病1范围本部分规定了小鞘指环虫病的流行情况与临床症状，以及小鞘指环虫（Dactylogyrus uuginulatus）采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法。本部分适用于鲢、等淡水鱼类患小鞘指环虫病的流行病学调查、诊断、监测和检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T 7103水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料3.1水：配置试剂用水应符合GB/T 6682中一级的规定。3.2乙醇：分析纯。3.3　Taq酶：一20℃保存,不得反复冻融或温度剧烈变化。3. 4 dNTPs:含 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 10 mmol/ L 的混合物。3.5 上游引物 F:5- TTATGTGGACCTCTGT-3。3.6 下游引物 R:5-AGCCGAGTGATCCACCA-3。3. 7 DNA Marker(bp):2 000、1 000、750、500、250、100。3.8其他试剂见附录 A。4　仪器和设备4.1体视显微镜和生物显微镜。4.2台微尺、目微尺、显微摄影设备。4.3PCR扩增仪。4.4紫外透射仪或凝胶成像仪4.5电泳仪。4.6普通冰箱和超低温冰箱。4.7离心机和离心管。4.8电子天平。4.9恒温水浴箱和微波炉。4.10微量移液器及吸头。4.11解剖盘、剪刀、镊子、解剖针。4.12载玻片、盖玻片、橡皮泥、培养皿和吸管。1 SC/T 7218. 1-20155 流行情况与临床症状5.1流行情况小鞘指环虫能感染鲢（Hypophthalmichthys molitrix）、（Aristichthys nobilis）等。全国各地均可发生，发病高峰水温为9℃～21℃。5. 2 临床症状小鞘指环虫主要寄生于鱼的鳃部。病鱼鳃组织损伤，鳃丝肿胀、贫血，有斑点状淤血，鳃上有大量黏液。重度感染时，鳃丝显著肿胀，鳃盖张开，病鱼极度不安、窜动、狂游，或游动缓慢、呼吸困难、上浮水面而死。6指环虫采集与固定6.1 病鱼采集捞取具有典型症状的鱼。如果现场无病原分离条件，将采集的病鱼用80%乙醇固定。样品封存和运输应符合 SC/T 7103 的规定。6.2指环虫样品的采集用针刺鱼脑，将鱼杀死。完整的取下全鳃，用小剪刀将鳃片分离，取一片鳃置于培养Ⅲ中，洒水少许。用解剖针将虫体从鳃丝上剥离，用吸管吸出，放在载玻片工。在盖玻片的四角涂少量橡皮泥避免盖玻片将虫体直接压碎，用镊子轻压盖玻片，显微镜下观察。6.3指环虫样品的固定与保存加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取一个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片，用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，直到水基本吸干为止。加上一滴APG溶液（见A.1)到盖玻片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙。用于形态学鉴定的虫体样品用70%乙醇保存，用于分子检测的虫体样品用95%乙醇保存。7小鞘指环虫的鉴定7.1小鞘指环虫的形态学鉴定显微镜下指环虫前端有2对头器、2对黑色眼点，呈方形排列，此为判断指环虫的简易特征。微调焦距即可观察到指环虫后吸器的中央大钩、联结片和边缘小钩，指环虫靠近头部端可观察到交接器，后吸器与交接器是指环虫鉴定的重要特征。根据需要用镊子轻压盖玻片以凸显几丁质结构进行拍照。小鞘指环虫虫体大型,体长1.45mm～1.95mm，宽0.20mm~～0.3lmm。联结片呈片状,副联结片