实用仪器分析---9.色谱分析法.ppt

The elution order will be somewhat reversed but not exactly - other factors must also be considered. 第四节 液相色谱类型 二、吸附色谱法 1.原理 吸附剂作为固定相； 也称液固色谱法（Liquid-solid chromatography，LSC）。 第四节 液相色谱类型 根据样品中各组分吸附能力的不同进行分离。 吸附剂表面发生样品（X）与流动相中溶剂（S）的竞争吸附反应 第四节 液相色谱类型 K越大，吸附增大，洗脱困难，保留时间增加。 2.固定相 薄壳硅胶： 直径30-40微米玻璃实心球，表面1-2微米多孔硅胶；固定相薄、传质快、装填紧密、柱效高，比表面小，上样量低； 多孔硅胶： 纳米级硅胶颗粒组成直径5微米、10微米的颗粒；柱效率高，上样量大。 与样品不反应，机械性能好，不溶胀； 硅 胶 氧化铝 聚酰胺 第四节 液相色谱类型 3.流动相选择 极性大的样品采用极性强的洗脱剂； 极性小的样品采用极性弱的洗脱剂。 第四节 液相色谱类型 1.原理 三、离子色谱法（Ion chromatography，IC） 根据离子交换树脂上可电离的离子，与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换。 第四节 液相色谱类型 阳离子交换树脂 阴离子交换树脂 第四节 液相色谱类型 平衡常数也就是离子交换反应的选择性系数 分别表示溶液中洗脱剂离子和被测离子浓度； 分别表示树脂中洗脱剂离子和被测离子的浓度。 第四节 液相色谱类型 选择性系数越大，交换的离子数目越多，树脂与离子之间的相互作用越强； 选择性系数越大，B离子就越容易保留而难于洗脱。 第四节 液相色谱类型 交换离子电荷越高、半径越小，作用越强; 磺酸型阳离子交换树脂，离子选择性系数由大到小顺序为： 强碱型阴离子交换树脂，离子选择性系数由大到小顺序为： 第四节 液相色谱类型 2.固定相 苯乙烯树脂等高分子聚合物作为骨架（基质）； 树脂中交联剂含量用交联度表示: 第四节 液相色谱类型 交联度越大，网状结构越紧密，离子进入树脂阻碍作用越大，使分离速度下降；但同时使大体积离子进入树脂困难，具有一定的选择性。 苯乙烯树脂采用苯乙烯单体，二乙烯苯为交联剂而形成球形网状结构; 离子交换树脂的交换能力用交换容量表示; 理论交换容量为1克干树脂含离子交换基团的物质的量。 在实验条件下，1克干树脂真正含参加交换反应基团的物质的量为实际交换容量。 第四节 液相色谱类型 ⑴薄壳树脂（直径30-40微米） 优点：传质快，柱效率高，耐高压。 缺点：交换容量小。 ⑵多孔树脂(直径10-20微米) 优点：交换容量大。 缺点：传质比较慢，柱效率略微下降，不耐高压。 ⑶离子键合相 具有以上二者的优点。 ⑷ 特殊以纤维素作为骨架，适合于生物大分子的分离和分析。 第四节 液相色谱类型 3.流动相 一般采用缓冲液作为流动相； 分析有机酸碱时，选择原则为缓冲液pH=pKa； 分析混合酸碱时，采用梯度洗脱方式； 离子强度增加，交换能力下降。 第四节 液相色谱类型 第四节 液相色谱类型 四、尺寸排阻色谱法 （Size exclusion chromatography，SEC） 凝胶色谱法、凝胶过滤色谱法、凝胶渗透色谱法或空间排阻色谱法; 凝胶是经过交联的多聚体，具有立体网状结构，内含大量液体（水），柔软而富有弹性。 第四节 液相色谱类型 采用凝胶作为固定相的色谱分析法。 1.原理 凝胶仅起到“分子筛”作用,不与样品发生物理和化学作用。 第四节 液相色谱类型 2.固定相和流动相 凝胶分为硬质、软质、半硬质三种。 ⑴硬质（玻璃球、多孔硅胶） 特点: 具有稳定的孔径分布，粒度范围小。 要求: 流动相与凝胶性质相似，以防止吸附作用发生，使凝胶润湿。 第四节 液相色谱类型 ⑵软质（葡聚糖、琼脂糖胶） 特点： 水为流动相，网眼大，易膨胀，适合大分子分析，不耐高压。 ⑶半硬质（二乙烯苯） 特点： 采用非水溶剂作为流动相。 第四节 液相色谱类型 第四节 液相色谱类型 五、亲和色谱法（Affinity chromatography） 1.原理 利用生物分子亲和力进行的色谱分析法; 许多生物大分子能够与结构对应的某种专一分子可逆地结合，酶与底物、抗原与抗体、激素与受体、RNA与其互补的DNA等，这种结合力称为亲和力。 第四节 液相色谱类型 其它组分洗脱后，改变条件降低亲和物与配基的结合力，或使间隔基“手臂”断裂，被测组分就可以被洗脱下来。 第四节 液相色谱类型 特别适合于生物化学，用于各种酶、辅酶、激素和免疫球蛋白等生物分子的分离。 Refractive index detector 第二节 HPLC色谱仪 Refractive index