第十章 电泳分离.pdf

《生化分离工程》 Bioseparation Engineering 第10章 电泳分离 生化分离过程的一般流程： 原料液 细胞分离(离心，过滤) 路线一 路线二 细胞－胞内产物 清液－胞外产物 路线一B 细胞破碎 路线一A 包含体 碎片分离 溶解(加盐酸胍、脲) 粗分离(盐析、萃取、超过滤等) 复性 纯化(层析、电泳) 脱盐(凝胶过滤、超过滤) 浓缩(超过滤) 精制(结晶、干燥) 10. 电泳分离 Electrophoresis 10.1 概述 10.2 电泳的理论基础 10.3 电泳的类型 10.4 应用举例 10.1概述 电泳： 是荷电溶质( 电解质)在电场作用下发生定向泳动的现象。 电泳分离的原理： 利用荷电溶质在电场中泳动的速度的差别进行分离。 在表象上电泳与色谱技术相似都是差速分离方法，只是 产生溶质移动速度差的不同：色谱是一种浓差驱动传质的平 衡分离法，而电泳是外力作用下的差速分离法。 电泳原理动画 电泳系统的基本组成 • 电泳槽：是凝胶电泳系统的核心部分，管式电泳槽、垂直 板电泳槽、水平板电泳槽 • 电源：聚丙烯酰胺凝胶电泳200~600V ，载体两性电解质 等电聚焦电泳1000~2000V，固相梯度等电聚焦 3000~8000V • 外循环恒温系统：高电压会产生高热，需冷却； • 凝胶干燥器：用于电泳和染色后的干燥； • 灌胶模具：制胶，玻璃板和梳子； • 电泳转移装置：利用低电压，大电流的直流电场，使凝胶 电泳的分离区带或电泳斑点转移到特定的膜上，如PVDF 膜。  电泳洗脱仪：回收样品  凝胶扫描和摄录装置：对电泳区带进行扫描，从而给出 定量的结果。 图9-1 电泳装置 图9-2 利用电泳技术分离血清蛋白 电泳分离的分类： 根据使用的电解质系统： ①. 自由界面电泳；②. 自由溶液中的区带电泳；③. 在不 同支持物上的区带电泳；④. 在有机溶剂中的凝胶电泳； ⑤. 亲和电泳；⑥. 等速电泳；⑦. 等电聚焦；⑧. 免疫电泳 等。 根据用与不用支持体： ①. 自由电泳；②. 凝胶电泳。 根据操作方法