NYT 1156.16-2008农药室内生物测定试验准则 杀菌剂第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1156.16—2008杀菌剂农药室内生物测定试验准则第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法Guideline for laboratory bioassay of pesticidesPart 16:The turbidimeter test for bactericide inhibit bacteria reproduction2008-05-16 发布2008-07-01实施中华人民共和国农业部5发布 NY/T 1156. 16—2008前言《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》为系列标准：第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法；第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法；一第3部分:抑制黄瓜霜霉菌病菌试验平皿叶片法;第 4部分：防治小麦白粉病试验盆栽法；第5部分：抑制水稻纹枯病菌试验蚕豆叶片法；第6部分：混配的联合作用测定；第7部分：防治黄瓜霜霉病试验盆栽法;第8部分：防治水稻稻瘟病试验盆栽法；第9部分:抑制灰霉病菌试验叶片法;第 10部分：防治灰霉病试验盆栽法；第11部分：防治瓜类白粉病试验盆栽法；第12部分：防治晚疫病试验盆栽法；第13部分：抑制晚疫病菌试验叶片法;第14部分：防治瓜类炭疽病试验盆栽法；第15部分：防治麦类叶锈病试验盆栽法;第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法;本部分是《农药室内生物测定试验准则』杀菌剂》的第16部分。本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所。本部分主要起草人：朱春雨、吴新平、袁善奎、李钟华、徐文平、张薇、杨峻。I NY/T 1156. 16—2008农药室内生物测定试验准则杀菌剂第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法1范围本部分规定了浑浊度法测定杀菌剂抑制细菌生长量的试验方法。本部分适用于农药登记用杀菌剂抑制植物病原细菌生长的室内生物活性测定试验。2仪器设备普通实验室常规仪器设备。2.1 电子天平(感量0.1 mg)。2.2生物培养箱。2.3压力蒸汽灭菌器。2.4 浊度仪。2.5移液管或移液器等。3 试剂与材料方法所用试剂，凡未指明规格者,均为分析纯;水为蒸馏水。3.1病原细菌供试植物病原细菌为野生敏感型菌株，记录菌种来源。根据试验目的和要求及菌种的生长规律，预先在固体培养基斜面上培养至适用期，作菌种备用。3.2培养基根据试验靶标细菌特性，一般选用 NA(nutrient agar)培养基(1 L NA 培养基含聚蛋白陈 5 g,酵母粉 1g,牛肉浸膏3g,蔗糖 15g,琼脂17g,用 10mol/L的 NaOH 调至 pH 7.0)和 NB(nutrient broth)培养基(1 L NB培养基含聚蛋白陈 5g,酵母粉 1g,牛肉浸膏 3g,蔗糖 15 g,用 10 mol/L 的 NaOH 调至pH 7.0)。在100 mL广口三角瓶中装量 50 mL,封口灭菌。3.3试验药剂原药(或母药）。3.4 对照药剂采用已登记注册且生产上常用的原药（或母药），其化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近。4 试验步骤4.1 药剂配制水溶性药剂直接用蒸馏水溶解稀释。其他药剂选用合适的溶剂(甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜等)溶解后，用0.1%的吐温-80 或其他合适的表面活性剂水溶液稀释。根据药剂活性，设置5个～7个系列质量浓度,有机溶剂最终含量一般不超过0.5%～1%。4. 2 药剂处理与培养按试验设计浓度在灭菌后冷却的 NB培养基中定量加人药液，每处理设 4个重复，并设只含溶剂和1 NY/T 1156. 16—2008表面活性剂而不含有效成分的处理作空白对照。将生长在 NA 培养基斜面上的菌种用灭菌水稀释为1×10°个孢子/mL浓度的悬浮液，向各处理培养基中分别接种100μL菌液，置于28℃～30℃条件下振荡培养(120 r/min)。4.3调查开始培养前分别测定各处理的浑浊度，待对照处理达到对数生长期时，测定并记载各处理的浑浊度。5数据统计及分析5.1 计算方法根据调查数据,按公式(1)计算细菌的生长抑制率，以百分数(%)表示，计算结果保留小数点后两位。P= 二A ×100(1)Ao式中:p-生长抑制率;A。-—空白对照浑浊度增加值;A1一一药剂处理浑浊度增加值。5.2统计分析用DPS（数据处理系统）、SAS（统计分析系统)或SPSS（社会科学统计程序)等标准统计软件对药剂浓度对数值与防效几率值进行回归分析，计算各药剂的 EC5o、ECo等值及其95%置信限，并进行各药剂处理间的差异显著性分析。6结果与报告编写根据统计结果进行分析评价，写出正式试验报告。2 00990中华人民共和国农业行业标准农药室内生物测定试验准则杀菌剂第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法NY/T 11