鸭脖微生物学检验.doc

食品安全检测 综合实习Ⅱ实习报告 题 目 鸭脖微生物学检验 姓 名 专业班级 指导教师 中国·武汉 二○一四 年 六 月 目 录 项目一 鸭脖菌落总数计数 1 项目二 鸭脖霉菌、酵母菌计数 3 项目三 鸭脖大肠菌群计数 4 项目四 鸭脖金黄色葡萄球菌检验 6 项目五 鸭脖沙门氏菌检验 7 项目六 鸭脖志贺氏菌检验 10 项目七 罐头食品的商业无菌 11 综合分析 12 实习心得 12 项目一 鸭脖菌落总数计数 1 引言 菌落总数的检测可作为食品被微生物污染程度的标志（或食品清洁状态的标志）；预测食品贮存期限（保质期）；食品中细菌总数还能反映食品的新鲜程度、是否发生变质。 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。所检微生物只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧或兼性厌氧菌的菌落总数。菌落总数不等于细菌总数。 2 仪器和试剂 （一）仪器 移液管4支（1ml）、试管3支、锥形瓶2个（500ml，250ml）、培养皿8个、 无菌剪刀、酒精灯、酒精棉、玻璃珠、洗耳球 （二）试剂 1、平板计数琼脂（PCA）培养基： 将5.0g胰蛋白胨、2.5g酵母浸膏、1.0g葡萄糖、15.0 g琼脂加于1000mL蒸馏水中煮沸溶解，调节pH 7.0±0.2。分装于锥形瓶，121℃高压灭菌15 min。 2、生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15 min。 3 实验步骤 1、取225ml生理盐水于锥形瓶中（少量玻璃珠）；分别取9ml生理盐水于3支试管中。 2、用无菌剪刀剪取25g样品于225ml无菌生理盐水中，震荡摇匀。制成10-1稀释液。 3、反复吹吸后移取1ml 10-1稀释液于9ml无菌盐水中，制成10-2稀释液，同样操作制备10-3稀释液。 4、选择10-1、10-2、10-3三个稀释度的样品稀释液，用无菌移液管先反复吹吸，分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿；同时，分别吸取1mL无菌生理盐水到2个平皿中作为空白对照 5、熔化培养基及时将已冷却到46℃左右的培养基倾入到平皿中，并转动平皿使其混合均匀。 7、待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃培养48 h±2 h 8、菌落计数： ①取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数 ②其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数 ③当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 9、菌落计数： ①若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g样品中菌落总数结果。 ②若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算： …………………………………公式（1） 式中： N——样品中菌落数； ∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。 ③若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 ④若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 ⑤若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 ⑥若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 4 实验结果 表1 鸭脖菌落总数 稀释度 10-1 10-2 10-3 空白 菌落数（CFU） 0 0 0 0 0 0 0 0 平均数 0 0 0 0 由表1知，所有稀释度平板菌落总数均为0，则由菌落计数方法知样品的菌落总数为10CFU/g GB2726-2005熟肉制品卫生标准中酱卤肉规定菌落总数≤80000cfu/g，本样品的菌落总数与国标的相对比，小于国标规定的限值，故本样品符合国标要求。