第一章 蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加.PDF

中南大学学报（医学版） 2014, 39(7) J Cent South Univ (Med Sci) 687 DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2014.07.006 /xbwk/fileup/PDF/201407687.pdf 蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道 上皮细胞血红素加氧酶- 1的表达 江刚，刘志光 （湖南省人民医院呼吸内科，长沙 410005) [ 摘要 ] 目的：探讨蛋白激酶 C(PKC)- 红系衍生的核因子相关因子 2 (Nrf2) 对香烟烟雾提取物 (CSE) 诱导 的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶 -1(HO-1) 表达的影响。 方法 ：将 25 只 SD 大鼠的气道上皮细胞随机分为对 照组、CSE3h 组、RO318220(PKC 抑制剂 ) 组、Nrf2 siRNA 组和 Nrf2 siRNA+RO318220 组，每组 5 只。对照组 用 DMEM/F12 正 常 培 养，CSE3h 组 用 10% CSE 共 培 养 3 h ；RO318220 组 则 用 3 μmol/L RO318220 预 处 理 0.5 h ， 余 处 理 同 CSE3h 组；Nrf2 siRNA 组 先 用 Nrf2 siRNA 预 处 理， 余 处 理 同 CSE3h 组；Nrf2 siRNA+RO318220 组则先用 3 μmol/L RO318220 和 Nrf2 siRNA 预处理，余处理同 CSE3h 组。用 Western 印迹法分别检测 HO-1 ， Nrf2 和 PKC 蛋白表达，细胞免疫化学法观察 HO-1 蛋白表达，反转录 - 聚合酶链反应 (RT-PCR) 法检测 HO-1 mRNA 表达，免疫荧光法观察 Nrf2 核转位，测定 HO-1 活性。 结果 ：CSE 明显诱导 Nrf2 核转位，其诱导作 用可被 RO318220 阻断。HO-1 蛋白在 CSE3h 组强阳性表达，在对照组、RO318220 组、Nrf2 siRNA 组和 Nrf2 siRNA+RO318220 组均弱阳性表达。 CSE3h 组 PKC 蛋白、HO-1 mRNA 和蛋白表达较对照组显著升高，HO-1 活性较对照组明显增强 (P0.05) 。PKC 蛋白表达水平在 Nrf2 siRNA 组和 CSE3h 组无明显差异 (P0.05) 。结论 ： CSE 通过 PKC 信号通路诱导 Nrf2 核转位，上调 HO-1 的表达水平。 [ 关键词 ] 香烟烟雾提取物；蛋白激酶 C ；红系衍生的核因子相关因子；血红素加氧酶 - 1 Protein kinase C-nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 regulating the expression of heme oxygenase-1 in rat airway epithelial cells JIANG Gang, LIU Zhiguan g (Department of Respiratory Medicine, Hunan Provincial People’s Hospital, Changsha 410005, China) AbstrACt Objective: To observe the effect of the signaling pathway of protein kinase C (PKC)-nuclear factor- erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) on the expr