黄曲霉毒素检测方法研究现状.doc

江西科技师范大学 学年论文 题 目：黄曲霉毒素检测方法研究现状 院（系）：生命科学学院 专 业：生物工程（1）班 学生姓名：王涛 学 号 指导教师：龚妍春 2012年 月 日 黄曲霉毒素检测方法研究现状 专业：工程 班级：0级1班 作者： 指导老师：TrucksessMW在TLC的基础上又发展了高效薄层色谱法(HPTLC)，该法可根据待测样品的不同，改变各种分析条件，如展开剂、进样技术、展开槽、检测方式等，以得到最佳检测效果。Abramson与1989年采用反向展开技术可检测包括AFB1在内的18种真菌毒素，灵敏度达到0.1 Lg/ kg~0.5Lg/ kg。张鹏等采用多功能净化柱与HPTLC法结合检测花生中的黄曲霉毒素, 检出限达0.5Lg/ kg, 以空白样品为基底，样品中加入0.5ng/ g~ 10ng/ g AFB1标准品，平均回收率为86. 5%~ 99. 0%。薄层层析扫描仪的出现，使TLC法实现了定性定量的自动化。该方法的主要缺点在于样品提取时间比较长，而且受样品饲料中荧光物质干扰。 2.2.高效液相色谱分析法( HPLC) HPLC是近几年发展起来的检测AFB1的方法，主要是用荧光检测器检测，在适宜的流动相条件下，采用反相C18柱，使多种黄曲霉毒素同时分离。原理：样品中的黄曲霉毒素B1经柱层分离后，通过测量色谱峰的面积计算含量。该方法的优点是特异性强、灵敏度高、定量准确，可同时分离多种黄曲霉毒素, 操作简便，定量精确，适于大批量样品的分析。但所需色谱仪、积分仪价格昂贵，而且前处理复杂，建立方法比较困难，操作时需要专门的技术人员，目前未能广泛使用。涂文升应用该方法同时检测食品中4种黄曲霉毒素，分离效果好，重复性强，最低检出限达到pg级水平。回收率在92. 61%~ 99. 25%。 2.3.微柱法 微柱法测定黄曲霉毒素,是利用微柱管内的硅镁型吸附剂吸附黄曲霉毒素并在365nm紫外光下显示荧光，其强度与一定浓度的黄曲霉毒素含量成正比关系，由此可简略定量黄曲霉毒素。 陈达民通过微柱法采用以下步骤测定黄曲霉毒素：先把粉碎过20目筛的样品放在碘价瓶中，加入石油醚和甲醇溶液，给瓶塞上涂一层水，盖严防漏,放在振荡器上振荡，等静置分层后，用快速定性滤纸过滤，用移液管吸取甲醇溶液并加入氯仿，再静置分层，将氯仿提取液经无水硫酸钠脱水过滤，加入制好的微柱管中，待加液流至顶层时，加入氯仿-丙酮( 9：1)展开剂展开,流完后即可在365nm紫外光下观察结果，有微黄色荧光出现，则样品不含黄曲霉毒素，若蓝紫色荧光出现,则为阳性检出，再根据其荧光强度与事先已知含量的黄曲霉毒素标准管相比较确定其含量。 2.4.酶联免疫吸附法( ELISA) 酶联免疫吸附法是抗原(抗体)吸附剂和用酶标记的抗体(抗原)与标本中的待测物(抗原和抗体)起特异的免疫学反应，用测定酶活力的方法来增加测定的敏感度。大致采用两种方式检测黄曲霉毒素，一种是用双抗体夹心法，另一种是用竞争法。 Holladay等采取间接ELISA技术，检测了抗黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白( AFM1- BSA) 免疫原的特异性AFM1抗体。为了使用方便，利用酶联免疫原理研制出黄曲霉毒素快速测试盒, 能简便地定量测定黄曲霉毒素含量。赵晓联等应用这种快速测试盒测定黄曲霉毒素含量, 先用三氯甲烷提取样品，过滤，收集并水浴挥干提取液，再以甲醇( 5：5)溶解，最后用专用黄曲霉毒素试剂盒测定。 2.5.溴化荧光分光光度法(SFB) 样品经甲醇-水混合溶剂提取后，部分提取液通过固相分离柱前处理，500LL纯化的提取液用溴试剂衍生化后，立即放入荧光检测计中检测，样品荧光吸收度与硫酸喹啉液的吸收度比较可直接换算成黄曲霉毒素的总含量。Vicam公司VicamV2系列4型荧光光度计，可直接读出AF含量，该法已通过AOAC和美国农业部联邦谷物检测中心的认证，该法的最大优点是检测时刻不使用AF对照品, 同时快速、灵敏，适合大批量样品普查，仪器价格也较低，张雪辉等比较了用SFB法和溴衍生HPLC检测中药中AF的结果发现SFB法在测定中药时可能出现许多假阳性结果。 3. 黄曲霉毒素的检测的其他方法 3.1.加压薄层色谱法(OPTLC) OPTLC(加压薄层色谱) 是Tyihak在1979年提出的，它结合了经典薄层色谱法、高效薄层色谱法与高效液相色谱法的优点而发展起来的一种