饱和硫酸铵法提取IgG工艺的优化.pdf

2009年 1月 中国粮油学报 Vo1．24．No．1 第24卷第 1期 Journalof山eChineseCerealsandOilsAssoeiation Jna ．2009 饱和硫酸铵法提取 IgG工艺的优化 胡晓艳 王春维 赵胜军 胡 刚 周 海 石君霞 杨书慧 (武汉工业学院动物营养与饲料科学湖北省重点实验室，武汉 430023) 摘 要 为获得最佳的IgG提取工艺参数，采用单因素试验设计，借助SDS—PAGE分析方法对温度、静置 沉降时间、pH值三个因素进行了优化。结果表明：最佳工艺参数分别为提取温度 3O℃，静置时间45min，pH 值 7．0。另外对提取温度、静置时间和pH值进行了三因素三水平正交试验设计，结果表明：提取温度 20℃，静 置时间45rnin，pH值 7．4时，IgG含量最高，达到了88．08％。 关键词 IgG含量 提取温度 静置时间 pH值 中图分类号：TQ937+．1 文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2009)01—0118—03 免疫球蛋 白c(Immunogobulin，简称 IgG)是一类 基于此，本试验在前人研究的基础上，以猪血浆 具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，普 为原料，采用硫酸铵分级盐析法，对温度、静置时问 遍存在于哺乳动物和人类的血液、组织液及外分泌 和pH值等提取工艺参数进行优化，提高产品纯度， 液中，它在动物体内具有重要的免疫和生理调节作 以期为工业化生产免疫球蛋白提供依据。 用，是动物体内免疫系统最关键 的组成物质之一_1J。 它的生物学功能主要表现为与相应抗原特异性结 1 材料与方法 合、激活补体、结合细胞产生多种生物学表达、通过 1．1 试验材料 胎盘传递免疫力等方面2。目前有大量研究报道了 新鲜抗凝猪血 (湖北长丰肉联厂)，4000r／rain 口服免疫球蛋白可 以有效地预防和治疗婴幼儿及成 离心分离 10min，得血浆，一80℃保存备用。 人由大肠杆菌和轮状病毒引发的腹泻，无任何副作 1．2 试验试剂 用。因此它被作为一种功能性食品添加剂广泛应用 硫酸铵：上海凌峰化学试剂有限公司；十二烷基 到营养保健食品中_3J。 硫酸钠 (SDS)，丙烯酰胺 (Acr)，甲叉双丙烯酰胺 目前，实验室分离纯化免疫球蛋白的方法很多， (Bis)，过硫酸铵，2一巯基乙醇，考马斯亮蓝 R250，冰 其中最常用的是盐析法。该方法操作简便，成本低 乙酸，标准蛋 白质 Marker，甲醇，甘氨酸，甘油，溴酚 蓝：上海捷瑞生化试剂有限公司；其他试剂均为分析 廉，适用于大量原料的处理。硫酸铵是盐析法最常 纯。 用的无机盐，主要原因是它溶解度大(25oC时可达4． 1．3 试验仪器 1mol／L)，随温度变化小，对蛋白质有保护作用，高浓 DDL一5M低速冷冻离心机：赛特湘仪离心机仪 度时可抑制微生物和蛋 白酶的活性，价格也不贵。 器有限公司；中空纤维超滤机：无锡超滤设备厂；DYY 研究发现，硫酸铵沉淀血浆蛋白的一般规律为：饱和 一 6c型电泳仪：北京六一仪器厂；自动凝胶成像分析 度为20％时，纤维蛋 白析出；30％～35％时，一球蛋 系统：Syngene。 白析出，饱和度达5