血清microRNA表达与胃癌相关性研究.doc

血清胃蛋白酶原检测在胃癌早期诊断中的价值胃癌gastric cancer, GC)是我国最常见的恶性肿瘤之一占我国主要恶性肿瘤死亡之第三位胃癌早期一般无症状，绝大多数病人发现时已进入中晚期，给带来严重危害。PGⅠ、PGⅡ。PGⅠ主要由胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌，PGⅡ除上述细胞分泌外还来源于幽门腺及十二指肠腺。大部分PG进入胃腔，但也有少量透过胃黏膜毛细血管进人血液中，故可以从血清中检测。有研究表明，胃粘膜不同部位的病变和严重程度，包括胃粘膜萎缩、肠上皮化生、异型增生及恶变均与血清PG含量变化相关。联合测定血清PGⅠ、PGⅡ的水平及其比值可起到胃粘膜“血清学活检”的作用。 本研究利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定消化性溃疡、慢性萎缩性胃炎、胃癌及胃癌术后患者PGⅠ、PGⅡ的含量及PGⅠ/PGⅡ比值的变化。研究血清胃蛋白酶原含量变化与胃癌的发生及复发的关系，探讨其作为胃癌早期诊断及复发预测标记物的可能性及临床应用价值选取抚顺矿务局总医院至46例，男32例，女14例，平均年龄60.5岁；胃癌60例，男48例，女12例，平均年龄54.6岁。所有病例按诊断分组。胃癌组早期胃癌13例，进展期胃癌47例；行全胃切除术36例，胃大部分切除术22例；术后随访58例，其中全胃切除术后复发15例(经胃镜活检病理确诊，B 超、CT发现胰、肝等处肿块或锁骨上淋巴结肿大)。另择同期健康查体者60例作为正常对照组，其中男40例，女20例；年龄32-68岁，均无胃十二指肠疾病史。本研究经抚顺矿务局总医院伦理委员会批准所有均签署知情同意书3ml，分离血清后迅速冷冻，存于-20℃冰箱中待测。胃癌患者术后再次抽取静脉血。以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测血清PGⅠ，PGⅡ含量。试剂盒由芬兰BIOHIT公司提供，严格按说明书中的步进行操作，反应结束后测吸光度，根据已知标定物作标准曲线计算样本血清PGⅠ，PGⅡ的浓度。 ELISA法检测血清PGⅠ含量： 稀释血清样品(1:10) 将标准品、控制液和稀释后样本各100ul加入酶标板加样孔内 室温振荡，孵育lh 各孔加35Oul洗涤缓冲液，洗涤3遍，弃去洗液 各孔加10Oul偶合液，室温振荡，孵育30min 各孔加35Oul洗涤缓冲液，洗涤3遍 各孔加1OOul底物，室温避光3Omin 各孔加1O0ul终止液，结束反应 酶标仪450nm波长处读取吸光度。 绘制标准曲线，计算样品的浓度。 ELISA法检测血清PGⅡ含量： 稀释血清样品(1:5) 将标准品、控制液和稀释后样本各100ul加入酶标板加样孔内 室温振荡，孵育lh 各孔加35Oul洗涤缓冲液，洗涤3遍，弃去洗液 各孔加10Oul偶合液，室温振荡，孵育lh 各孔加35Oul洗涤缓冲液，洗涤3遍 各孔加1OOul底物，室温避光3Omin 各孔加1OOul终止液，结束反应 酶标仪450nm波长处读取吸光度。 绘制标准曲线，计算样品的浓度。 3.统计学处理 采用SPSS 13.0软件对数据进行分析P0.05为差异具有统计学意义血清胃蛋白酶原胃癌早期诊断中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所肿瘤病因与筛查研究室PGⅠ、PGⅡ及其比值用于胃癌诊断及筛查的临界值，有助于胃癌的早发现、早诊断、早治疗，尤其对于高龄、无法接受胃镜检查的患者，结合问诊、查体及影像学资料，以提高胃癌的检出率。研究成果预期以论文形式发表并应用于临床实践。 现有工作基础、条件和优势 项目负责人，杨玉超，女，主治医师，参与多项市级研究项目，撰写论文10余篇。 主要负责人，董奇观，男，主治医师，2012年7月获中国医科大学肿瘤学硕士学位，现工作于抚顺矿务局总医院肿瘤内科，从事胃癌的早期诊断及防治研究。熟练掌握肿瘤学相关理论及实验技能，如组织切片制备、病理诊断、DNA、RNA提取、PCR等技术。现已完成市科技攻关项目1项，参编论著1部，发表SCI论文3篇，国家级核心期刊3篇，获第八届中国肿瘤学术大会优秀论文奖1项，市自然学术成果奖1项。 前期工作已完成该项目的相关文献综述，课题设计及预实验。该研究得到局、院领导的大力支持，我院具备试验所需标本、仪器及人员配备。中国医科大学肿瘤研究所 抚顺矿务局总医院是一所集医疗、教学、科研、预防、康复为一体的三级甲等医院。为中国医科大学第七临床学院和研究生培养基地。员工在岗总人数1736人，卫生技术人员1430人，其中高级职称201人，中级职称629人初级职称611人。博士、硕士86人。硕士生研究导师9人，中国医科大学兼职教授73人，青年学科带头人13人，市名医8人。“973”项目（编号：2010CB529304） 2.2014年抚顺市科技攻关项目（编号：