microRNA-21microRNA-135b和microRNA-141在结肠癌组织中的表达及相关性.doc

microRNA-21、microRNA-135b和microRNA-141在结肠癌组织中的表达及相关性 探析结肠癌组织中microRNA-21、microRNA-135b和microRNA-141表达水平。采自癌切端结肠癌组织聚合酶链反应结肠癌结肠癌组织中microRNA-141、microRNA-135b、microRNA-21表达水平显著高于结肠癌，差异有统计学意义（P0.05）；结肠癌组织microRNA-141、microRNA-135b、microRNA-21表达水平与结肠癌是否发生淋巴结转移、进展分期等指标密切相关，差异有统计学意义（P0.05）。 【关键词】 结肠癌组织；微小RNA淋巴结转移 结肠癌的发病情况位列我国恶性肿瘤的第位，仅次于肺癌和胃癌之后，临床常见发病群体为中年男性[1]。近年来，研究显示结肠癌的发病、进展、转移和侵袭等病理过程与微小RNA（miRNA）水平密切相关。结肠癌组织中miRNA的表达及病理机制，是结肠癌诊断和治疗的新依据。有研究显示，结肠癌组织中miRNA-141、miRNA-135、miRNA-21出现过度表达情况，且与结肠癌是否发生淋巴结转移、进展程度密切相关[2]。探析结肠癌组织中miRNA的表达及病理机制，以及与结肠癌进展转移情况的相关性具有重要的临床价值，故笔者对院2013年5月2014年4月收治的结肠癌组织miRNA的表达水平进行检测，并探讨其与结肠癌转移进展情况的相关性，现报道如下。院2013年5月2014年4月40例结肠癌手术切除标本年龄5270岁，其中男29例，女11例，平均年龄（60.3±3.4）岁。全部标本均经病理学诊断证实，病例的临床病理资料完整，术前均未进行生物疗法、放疗、化疗等其他疗法。选同期体检健康者外周血40，其中男28例，女12例，年龄5270岁，平均年龄（60.3±3.3）岁。标本均采自癌切端、结肠癌组织，标本离体后即刻放置-196 °C液氮速冻，后放置-80 °C环境下存放。 提取组织总RNA所用实验物品均去RNase处理50～100 mg置存于-80 °C环境下变性缓冲液1 m的手动玻璃匀浆器内浴冰浴中匀浆充分将浴组织匀浆液转移至1.5 m的艾本德微量离心管管内，室温下置放5 min，完全分离核蛋白复合体将氯仿0.2 m加入，摇匀15 s，配平，冰盒内置放23 min，离心15 min，1 200/s，分离RNARNA沉淀吸取上层水相，向另一艾本德微量离心管内转移，入异丙醇0.5 m，充分混匀后-20 °C置放，离心15 min，1 200/s，RNA沉淀RNA清洗除去上清液1 mL75%乙醇，混匀震荡，离心5 min，7 500/s；共清洗2次RNA再溶解除去乙醇，将艾本德微量离心管管室温干燥510 min，挥发乙醇，将0.1%的处理水2030 μL溶解RNA沉淀，采集3 μ检测其纯度及浓度，采集4.5 μ检测RNA的完整性，其余用于合成cDNA第一链血浆提取RN制备洗液提取RNA进行mirVanaTMPARISTMKit法提取；RNA定量miRNA逆转录、PCR扩增定量分析PCR结果实时定量PCR检测miRNA表达，应用定量法计算。SPSS18.0软件分析，计量资料进行t检验，采用X±S表示，计数资料进行X2检验。对结肠癌miRNA表达水平的相关因素Logistic回归分析，以结肠癌miRNA表达水平作为因变量，患者一般资料作为自变量，多分类变量分别设置亚变量，P0.05差异结肠癌miRNA表达水平比较 结肠癌组织中microRNA-21microRNA-141、microRNA-135b表达水平显著高于结肠癌，差异有统计学意义（P0.05），见表1。表1 结肠癌组织及中miRNA表达水平比较 组别 miRNA-21 miRNA-141 miRNA-135b 结肠癌组织 8.50±4.11 0.19±0.07 0.10±0.03 结肠癌 4.12±2.20 0.03±0.01 0.02±0.01 t 5.94 14.31 16.00 P 0.05 0.05 0.05 2.2相关性分析 结肠癌组织中miRNA-141、miRNA-135b、miRNA-21表达水平与淋巴结转移、TNM分期情况密切相关，差异有统计学意义（P0.05），见表2。表2结肠癌组织表达水平相关性分析（X±S） 项目 MiRNA-135b MiRNA-21 MiRNA-141 t1，P t2,P t3，P 性别 男 29 0.10±0.03 8.50±4.11 0.19±0.07 0.86,0.40 0.39,0.70 女 11 0.09±0.04 8.49±4.12 0.18±0.08 年龄(岁) ≤60 22 0.10±0.06 8.5