第四章培养基配制2学时.ppt

（一）母液的配制方法： 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混合母液。 第二节 培养基的选择 在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛使用的基本培养基(如Ms培养基或B5培养基)开始。当通过一系列的实验，对这种培养基做了某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足实验需要的新培养基，选择最佳培养基。常用试验方法主要有单因子试验、多因子试验等。 一、单因子试验 在单因子试验中．由于培养基中其他成分都维持在一般水平上，所以只变动一个因子，就可以找出这一因子对试验的影响和影响的程度。例如Ms基本培养基的其他成分和用量都不变，只变动NAA用量对某一培养物生根的影响，这种只研究一个因素的试验就是单因子试验。 生物学试验不同于物理学或化学试验，最显著的差别是在生物学试验中必需设置对照组与试验组，试验组可以有一组或几组，随试验的复杂性而设置，对照组也可能有一组以上。试验中要求对照组与试验组中的试验个体，即植物组织块或其他培养物，必须在遗传性、生理状态、前培养条件等方面，尽可能完全一致。以保证试验结果是来源于试验因子，而不是由于试验材料的不一致导致的。 试验中各处理一般都要设有一定的重复，以取得可靠的试验结果。随试验规模和要求不同，大多每个项目要有4—10瓶，每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。 三、逐步添加和逐步排除的试验方法 在植物组织分化与再生的研究中，在没有取得可靠的分化与再生之前，往往添加各种有机营养成分，而在取得了稳定的再生之后，就可以逐步减少这些成分。在逐步添加时是使试验成功，在逐步减少时是缩小范围，以便找到最有影响力的因子，或是为了实用上的需要竭力使培养基简化，以降低成本和利于推广。在寻求最佳激素配比时，也经常用到这种加加减减的简单方法。 * * 第四章 培养基配制 一、母液配制与 保存 在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。 第一节 培养基配制 (二)母液配制要求： 1.防止沉淀：母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和SO42+，Ca2+、Mg2+和PO43- 一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。 2母液浓缩倍数：10-100 ，大量元素10；微量元素、铁盐100；有机物50； 3.选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂 4.药品的称量及定容都要准确。 5.激素母液浓度：1mg/ml,1次配成50或100 ml 6.激素溶解： IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容； NAA先溶于热水或95%酒精再加水； 2,4-D可用1mol／L的NaOH或KOH助溶，加入温水定容。 KT、BA先溶于1mol／L的HCl再加水。 7铁盐配法（MS为例）：将溶解的FeSO4.7H2O倒入已溶解的EDTA-Na2，并且边加边搅拌最后定容至500ml，置于冰箱中备用。 8记录，认真操作 母液配制流程图 确定培养基 称量 溶解 确定母液配方 定容 标签 保存 MS母液配方： I : NH4NO3 16.5g 500mL 20* KNO3 19g 500mL II CaCL2?2H2O 22g 500mL 100* III MgSO4?7H2O 37g 1L KH2PO4 17g 1L 100* IV KI 0.415g 500mL H3BO3 3.1g 500mL ZnSO4?7H2O