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第三章细胞免疫功能测定

第一节淋巴细胞计数和亚群测定

淋巴细胞各亚群细胞的膜表面均具有可供辨别的特殊结构，即表面标志。应用化

学方式可检测淋巴细胞在不同发育时期所含酶种类及含量的不同。检测外周血中

各类淋巴细胞及其亚群的数量，这对了解机体的免疫功能状态，研究某些疾病发

病机制及辅助临床诊断具有必然的意义。

（一）E花结实验

人类T细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，称E受体。该受体在体外与SRBC

结合，从而形成玫瑰花结样细胞团，可用来计数T细胞。

1、实验方式：

外周血淋巴细胞：2×106／m1

SRBC：2×108／m1

各取在试管中混匀，置37℃水浴温育5min，1000r／min离心5min，4℃冰箱放

置2h后掏出。轻轻吸去大部份上清，旋转试管使细胞重悬，取一滴细胞悬液于

载玻片上，甲苯胺蓝染色后镜检，结合3个以上SRBC的淋巴细胞为E花结形成

细胞，即T细胞。计数200个淋巴细胞后计算T细胞的百分率。

2、正常参考值：60％一80％

3、意义：有助于细胞免疫缺点性疾病的诊断和疗效观看，有助于对恶性肿瘤、

严峻病毒或真菌感染、活动期自身免疫疾病患者的疗效观看和预后判定。

（二）活性E(Ea)花结实验

部份T淋巴细胞与较低比例SRBC混合，经低速离心沉淀后，需在低温一起培育，

即能迅速形成E花结，故称为活性E花结形成细胞。现以为此类细胞对SRBC

具有高度亲和力的T细胞亚群，它能更灵敏地反映细胞免疫的水平和动态的转

变。

1、实验方式：同E花结实验大体相同，只是省去4℃冰箱放置2h一步。

2、正常参考值：15％一20％

3、意义：临床上用于评判癌症、免疫缺点病、迟发型变态反映、某些感染和组

织器官移植时人体细胞免疫状况和判定预后，并用于考核药物疗效，研究药物作

用机制等。

（三）稳固性E花结实验

在E花结实验中，如将形成的E花结在37℃放置30min，绝大多数会快速解离，

但有极少数振荡后仍不解离，称为稳固性E花结(Es花结)。

1、实验方式：按E花结实验操作形成E花结后，在37℃放置30min，计数Es

花结形率。

2、正常参考值：％一％

3、意义：Es花结的形成，是T细胞被激活的结果，是活化T细胞的一个标志，

可反映T细胞的功能，有助于了解细胞免疫的状态，在慢性活动性肝炎、急性

淋巴细胞血病、淋巴瘤、肝癌、妇科肿瘤等疾病中可显著升高。

（四）29℃E花结实验

E花结实验的结果与温度紧密相关，据实验推测，29℃条件下，某疾病患者T细

胞SRBC受体密度、亲和力有所改变，从而提出29℃E花结实验。据实验推测，

29℃条件下，某疾病患者T细胞SRBC受体密度、亲和力有所改变，从而提出

29℃E花结实验。

1、实验方式：淋巴细胞与SRBC混合后，离心，在29℃中共温1h，同上计数花

结形成率

2、正常参考值：49％一59％

3、意义：在恶性肿瘤、系统性红斑狼疮、病毒感染、肝炎、心肌梗死等患者中

29℃E花环形成率可明显降低。

（五）EA花结实验

B细胞：

EA花结：Fc受体

EAC花结：C3b受体

检测外周血B细胞的百分率。（EA花结为例）

1、实验方式：取1%鸡或羊红细胞悬液，加等容积的抗血清混合，置37℃水浴

温育30min，不时摇动，Hanks液洗涤3次，除去未结合的抗体，配成1%（致

敏RBC2×108／m1）的EA悬液。取淋巴细胞悬液与等量的EA悬液混合，置

37℃水浴温育30min，500r／min离心5min，以下同E花结实验。

（2）正常参考值：10%-19%

（3）意义：慢性淋巴细胞白血病时可升高，免疫缺点时降低。

（二）B细胞膜表面Ig(SmIg)测定：免疫荧光法测定SmIg

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（1）实验方式：取1-2×10／m1的外周血淋巴细胞，200r／min离心5min，弃

上清，加入50ml抗人免疫球蛋白荧光抗体，40℃反映60min，用含1%的BSA

的PBS洗涤3次，弃上清，制片，荧光显微镜检查。细胞周边显现线状荧光的

淋巴细胞为SmIg细胞，即B淋巴细胞，计算B细胞百分率。

（2）正常值：16%-20%

IgG:%%;

IgA:%%;