薄层层析分离方法.ppt

薄层层析分离技术 Thin-layer chromatography Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography. The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar. The principle of operation is the same! Thin Layer Chromatography Stationary Phase: Alumina Thin-Layer Chromatography: A Two-Component Mixture Important hint! Visualization Method The previous slide shows colored spots. Most of the time, the spots won’t show unless they are visualized! Vizualization is a method that is used to render the TLC spots visible. A visualization method can be: Ultraviolet light Iodine vapors to stain spots Colored reagents to stain spots Reagents that selectively stain spots while leaving others unaffected. Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Values Thin-Layer Chromatography: Qualitative Analysis 直线式展开 直线式展开技术可以分为近水平展开、上行展开、下行展开、双向展开和水平展开五种形式，薄层色谱分寓一般样品多采用上行展开方法。 显色方法 物理显色 化学显色 斑点组分定性、定量方法 比移值定性 光谱定性 各种联用检测仪器定性 目视比较半定量法 测量斑点面积以进行定量测定 从薄层上将被测组分洗脱下来进行定量测定 点样 ??? 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 展开剂配制 ??? 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。 展开系统的饱和 ??? 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 (a)点状点样 (b)条状点样 (c)颈部点样 (d)沟槽点样 1．氨基丙酸；2．β-氨基丙酸; 3．γ—氨基丁酸；4．精氨酸；5．丝氨酸；6．天门冬氨酸；7．羟基脯氨酸；8．脯氨酸；9．蛋氨酸；10．酪氨酸；11．谷氨酸；12．苏氨酸；13．甘氨酸; 14．组氨酸; 15．羧基赖氨酸；16．亮氨酸；17．异亮氨酸；18．赖氨酸；19．缬氨酸；20．蛋氨酸砜;21．色氨酸; 22．苯丙氨酸；23．磺基丙氨酸 23种氨基酸的双向层析图谱 温湿度的控制 ??? 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容