《层析分离技术》PPT课件.ppt
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层析分离技术..docx
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色层分别技术
色层分别：是一组相关技术的总称，也称为色谱分别或层析分别。按固定相的基质〔载体〕类型分类：
层析：载体一般为软基质的凝胶，常用的有纤维素、琼脂糖、交联葡聚糖、交联琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等，只适合在低压下操作。
色谱：载体一般为高强度的经过外表该性的硅胶、聚甲基丙烯酸或聚苯乙烯材料，适合在高压下使用。也有人将层析称为色谱。
用途：用在产品的精制阶段，目标是获得符合使用要求的产品。层析：一般用于生物大分子或酶的批量纯化。
高压液相色谱：具有生物活性的小分子物质的分别纯化。
色层分别过程包含两局部：
固定相：载体或载体+功能基团
流淌相〔洗脱液〕：缓冲液或有机溶
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层析分离法课件.ppt
第九章
分析测定中的分离方法9.4.1柱层析法9.4.2平面层析法第四节
层析分离法2025/5/69.4层析分离法
9.4.1柱层析法1.吸附柱层析法以吸附剂为固定相(硅胶、氧化铝和活性炭等)。根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这三种因素来选择适宜的条件。被分离的组分极性较强，应选择吸附性能较弱的吸附剂，同时选择极性较强的洗脱剂；或反之。吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜类烯物的分离等。2025/5/69.4层析分离法
2.凝胶柱层析法利用凝胶或其他具有分子筛性质的多孔性物质做固定相。对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进行分离纯化的一种方法。凝胶：葡萄糖凝胶、聚丙
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层析分离纯化技术-课件.ppt
层析分离纯化技术 蛋白质纯化策略 简易纯化选择 GST 融合蛋白的纯化 任何规模纯化都比较简单 GST MicroSpin? Purification Module 立即可用, 50 预装柱含缓冲液和所需试剂 可纯化每柱 400 μg, 体积达400 μl 样品 GSTrap? 柱 20 分钟内 每 1 ml 柱 12 mg 或 每 5 ml 柱 60 mg 使用针筒，蠕动泵，或者 ?KTA? 系统 添加剂兼容 GSTrap? GSTrap? Glutathione Sepharose? Fast Flow 适合装填在高效层析柱中和层析系统结合使用，并用作放大 GST 融合蛋白的检测 GST融
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《蛋白质的层析分离》PPT课件.ppt
郭 辉 简 介 CONTENTS CONTENTS CONTENTS * 蛋白质的层析分离 分离和提纯蛋白质方法多种多样，其中最为重要的两种方法就是电泳和层析。在这些方法中主要是利用蛋白质之间各种特性的差异，包括分子的大小和形状、酸碱性质、溶解度、吸附性质和对其他分子的生物学亲和力，在蛋白质层析方法中主要是凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析这三种 。 1.凝胶过滤层析 2. 离子交换层析 3.蛋白质亲合层析 是根据蛋白质分子大小不同的分离方法。 凝胶过滤层析 是根据蛋白质分子的
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天然药物层析分离PPT.ppt
第六节 层析分离 层析分离法也称色谱法，是1903年俄国植物学家Michael Tswett发现并命名的。将植物色素溶液通过装有CaCO3 吸附剂的柱子，然后用石油醚淋洗，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开。 一、层析分离法的基本原理 利用混合物中各组分物理化学性质的差异，使各组分在流动相和固定相中的分布程度不同，并以不同的速度移动而达到分离的目的。 二、层析分离法的分类 流动相有两种状态： *液体作为流动相 *气体作为流动相 固定相也有两种状态： *固体物质作为固定相 *以吸附在固体上的液体作为固定相 1、按两相所处的状态分类： 液相层析 液-固层析 液-液层析 气
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薄层层析分离方法.ppt
第31页，共88页，星期日，2025年，2月5日点样???尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。第32页，共88页，星期日，2025年，2月5日展开剂配制???选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造
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薄层层析分离方法.ppt
薄层层析分离技术 Thin-layer chromatography Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography. The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar. The principle of operation is the same!
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第8章4学时色谱层析分离.ppt
亲和吸附的载体通常是惰性的，往往不能直接 与配基连接，偶联前需要先活化，活化的方法 主要有： 溴化氰活化法：琼脂糖、葡聚糖引入亚氨基碳 酸盐； 高碘酸活化法：氧化多糖，生成烷基胺 环氧化法：多糖类载体与环氧氯丙烷作用生成环氧化合物，再与氨基偶联； 甲苯磺酰氯法： 双功能试剂法: 二乙烯砜 ①不溶于水，但高度亲水； ②惰性物质，非特异性吸附少； ③具有相当量的化学基团可供活化； ④理化性质稳定； ⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速； ⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过； ⑦能抵抗微生物和醇的作用。
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蛋白质层析分离纯化技术.ppt
准备 HiTrap? Chelating 柱 冲洗 5 ml H2O 加 0.5 ml 0.5 M NiSO4 冲洗 5 ml H2O 用 5-10 ml 20 mM Tris? -HCl, 5 mM 咪唑, 6 M 盐酸胍, 1 mM 2-巯基乙醇pH 8 结合缓冲液洗柱 最多 5 分钟 * 纯化和复性 稀释样品, 用 10 ml 结合缓冲液洗柱，5 mM 咪唑, 6 M 盐酸胍, pH 8.0 上样，并以 20 mM咪唑, 6 M 尿素 pH 8.0 缓冲液洗柱 复性 线性梯度：~ 6 to 0 M 尿素 最少 30 柱体积 流速： 0.1 ml/min - 1 ml/min
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蛋白质层析分离纯化技术讲述.ppt
准备 HiTrap? Chelating 柱 冲洗 5 ml H2O 加 0.5 ml 0.5 M NiSO4 冲洗 5 ml H2O 用 5-10 ml 20 mM Tris? -HCl, 5 mM 咪唑, 6 M 盐酸胍, 1 mM 2-巯基乙醇pH 8 结合缓冲液洗柱 最多 5 分钟 * 纯化和复性 稀释样品, 用 10 ml 结合缓冲液洗柱，5 mM 咪唑, 6 M 盐酸胍, pH 8.0 上样，并以 20 mM咪唑, 6 M 尿素 pH 8.0 缓冲液洗柱 复性 线性梯度：~ 6 to 0 M 尿素 最少 30 柱体积 流速： 0.1 ml/min - 1 ml/min
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工业分析 第三版 课件 2.2 薄层层析分离法.pptx
工业分析技术
02物质分离技术
+薄层层析分离法2.2薄层层析又称薄板层析，是将吸附剂（固定相）涂于玻璃或聚酯片上，以展开剂作流动相的色层分离法。薄层层析法是把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺成均匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层进行。试样中的各组分就沿着薄层在固定相和流动相之间不断的发生解吸、吸附、再解吸、再吸附的过程。试样中的各种组分将按其吸附能力强弱的不同而被分离开。试样中各个组分在薄层中的位置同样也用Rf来表示。和纸层析一样,在相同条件下进行层析时，某一组分的Rf值是一定的，因此可根据Rf值进行定性。由于影响Rf值的因素很多，例如吸附剂的种类，粒度的活化程度，展开剂的组成和配比，层析缸的形状和
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工业分析 第三版 课件 2.1 纸层析分离法.pptx
工业分析技术
物质分离技术
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纸层析分离法
2.1
纸层析法适用于少量试样中微量成分或性质相似的物质的分离和鉴定，是一种微量分离方法。纸层析在有机分析、生物化学、植物、医药分析中应用较广。
纸层析又称纸上层析，它是在滤纸上进行的色层分析法。滤纸被看作是一种惰性载体，滤纸纤维素中吸附着的水分或其它溶剂，在层析过程中是不流动的，称为固定相，在层析过程中沿着滤纸流动的溶剂或混合溶剂是流动相，又称展开剂。展开时，溶剂在滤纸上流动，试样中各组分在两相中不断地分配，即发生一系列连续不断的抽提作用，根据各物质在两相中的分配系数不同，达到分离的目的。
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纸层析分离法
2.1
试样经层析后，可得到如图2-1
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第十章层析分离法应国清老师课件.ppt
4、特点 可直接分离盐析后的蛋白质 可通过调节疏水配基链长和密度改变吸附力 疏水性吸附剂种类多，选择余地大。 八. 有机染料亲和层析 定义——利用某些类似于NAD+结构的有机染料（蒽醌及偶氮化合物）作为配基制成亲和层析剂进行差别分离过程。 特点——结合容量大；配基价廉、易得；层析剂制备简便；化学稳定性好。 思考题 何谓色层分离法？可分为那几大类？ 简述柱层析系统的工艺流程。 何谓保留值、分配容量K、分离度？ 何谓亲和色层分离法？亲和力的本质是什么？亲和色层中常用的亲和关系有那几种？ 何谓疏水作用层析？其最大的特点是什么？ 柱层析法与固定床吸附法有何异同点？ 第十章 层析技术 （Chro
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实验1、氨基酸纸层析分离鉴定.doc
实验一 氨基酸的分离鉴定————纸层析法
一 预习思考题
本实中滤纸的作用是什么？
实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？
Rf值的含义。影响因素？
两Rf值之差为多少范围内可以确定为同一物质？
层析滤纸和普通滤纸有什么区别？
为什么要平衡？平衡剂和扩展剂是同一物质吗？
用手直接接触滤纸会引起什么不良后果，为什么？
缝制的纸筒如果两边缘相靠会造成什么后果？
为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？
标记滤纸不能使用油性笔，为什么？
查阅资料，解释纸层析分离氨基酸原理。
纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相。
以水相为固
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Rubisco的层析分离和电泳离心.doc
一、实验目的： 了解凝胶过滤层析法和SDS垂直板型电泳法的基本原理及操作技术。 学习并掌握SDS－PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。
二、实验原理：
凝胶过滤层析法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。也叫做分子排阻层析。一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱