40.培养基适用性检查.doc

文件名称 培养基适用性检查操作规程 文件编号 JB-TZ-040-A 编 制 人 仲召达 编制日期 年 月 日 复制份数 审 核 人 审核日期 年 月 日 颁发部门 质量管理部 批 准 人 批准日期 年 月 日 生效日期 分发部门 质检室、质保室、质量管理部 编订依据 《中华人民共和国药典》2010年版 目 的：建立一个培养基适用性检查操作规程。 范 围：微生物限度检查中的成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。 责 任：检验员、QA人员、质检主任、质保主任、质量管理部长、质量总监。 内 容： 1 计数培养基的适用性检查 微生物限度检查中计数培养基有3种，营养琼脂、玫瑰红钠琼脂和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂。 计数培养基适用性检查试验用菌株 大肠埃希菌[CMCC（B）44 102] 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]。 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]。 白色念珠菌[CMCC（F）98001] 黑曲霉菌[CMCC（F）98003] 菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，培养18~22h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养24~48h。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上 ，培养5~7天，加入3~5ml含0.05%（ml／ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml／ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。 菌悬液制备后，若在室温下放置应在2h内使用，若保存在2~8℃，的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉菌的孢子悬液保存在2~8℃，可在验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。 培养基制备 按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）玫瑰红琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。 营养琼脂培养基 取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50-100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，硬固后于30-35℃倒置培养48h，计数；被检培养基同法操作。 玫瑰红钠琼脂培养基 取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50-100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照玫瑰红那琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h，计数；被检培养基同法操作。 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50-100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h，计数；被检培养基同法操作。 1.3 结果判断 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。 2 控制菌检查用培养基适用性检查 控制菌检查用成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。 2.1 计数培养基适用性检查试验用菌株 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003] 乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094] 铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104] 生孢梭菌[CMCC（B）64941] 白色念珠菌[CMCC（F）98001] 菌液制备 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门、菌铜绿假单胞菌培养物少许，接种至10ml营养肉汤培养基内，置30~35℃培养18~24h，取均匀培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml含菌10~100cfu的菌悬液，其菌数在做对照试验的同时用营养琼脂注皿或平板涂布，经培养后计数确定。生孢梭菌接种至12ml硫乙醇酸盐流体培养基中，置30~35℃培养18~24h，用0.9%无菌氯化钠溶液制成1ml含菌10~100cfu的菌液。 2.2各种培养基需要测试的能力及判断指标 液体培养基促生长能力检查：取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养中，在相应控菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最