人血白蛋白方法技巧.ppt

蛋白质类药物—人血白蛋白;3;药物简介;;药物功能;生产工艺; ; 2 半成品检定 2.1 无菌检查 如半成品立即分装，可在除菌过滤后留样做无菌检查。 2.2 热原检查 注射剂量按家兔体重每1kg注射0.6g蛋白质, 在规定时间内，观察家兔体温升高的情况。 3 成品检定 3.1 鉴别试验 3.1.1 免疫双扩散法 仅与抗人血清或血浆产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊血清或血浆不产生沉淀线。 ; 3.3 化学检定 3.3.1 pH值 用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质含量稀释成10g/L，pH值应为6.4～7.4。 3.3.2 渗透压摩尔浓度 应为210~400mOsmol/kg。 3.3.3 蛋白质含量 按凯氏定氮法的钨酸沉淀法进行， 应为标示量的95.0～110.0% 3.3.4 纯度 应不低于蛋白质总量的96.0%。 3.3.5 钠离子含量 采用火焰光度法测定，应不高于160mmol/L。 3.3.6 钾离子含量 采用火焰光度法测定，应不高于2mmol/L。 ; ; 3.3.11 铝残留量 原子吸收分光光度法测定人血白蛋白制品，应不高于200μg/L。 3.4 激肽释放酶原激活剂含量 采用显色底物法测定，其含量应不高于35IU/ml。 3.5 HBsAg 按试剂盒说明书测定，应为阴性。 3.6 无菌检查 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 ; 3.7 异常毒性检查 本法是生物制品的非特异性毒性的通用安全试验，检查制品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。检查法除另有规定外，异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验。 3.8 热原检查 本法将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内， 观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。检查法 供试品或稀释供试品的无热原稀释液，在注射前应预热至38℃。供试品的注射剂量按各制品规程的规定。但家兔每1kg体重注射体积不得少于.5ml，不得大于10ml。注射剂量按家兔体重每1kg注射0.6g蛋白质，应符合规定。;;上海莱士血液制品股份有限公司;华兰生物工程股份有限公司;四川远大蜀阳药业股份有限公司;成都蓉生药有限责任公司;THANKS!;;; 康卫皿又称扩散皿，一般为玻璃制品，分为皿体和毛玻璃盖两部分。 皿体由内室和外室构成，毛玻璃盖有一边上有个缺口，其作用在于向皿体外室添加溶液。 康卫皿一般具有耐高温，耐酸碱，密封性好，光洁度高等优点，广泛应用于土壤测定分析，食品检测，药品成分分析，地质分析等方面的研究。;康卫扩散皿法 原理：依据乙醇在饱和碳酸钠溶液中加热逸出，被重铬酸钾硫酸溶液吸收后呈黄绿至绿色，用比色法测定血液制品中乙醇残留量该法为乙醇残余量限度测定法。 方法：1.在康卫皿外圈的凸出部位均匀涂抹凡士林，准确量取重铬酸钾一硫酸溶液2.0ml加入内圈中，量取饱和碳酸钠溶液1.5ml和精密量取的供试品溶液1.5ml，加入外圈中，立即加盖玻璃板(粗糙面向下)密封扩散皿，摇匀，80℃反应30分钟后，取内圈溶液，照紫外一可见分光光度法，在波长650nm处测定吸光度(A1)。精密称取无水乙醇适量，加水制成每1ml中含乙醇0.25mg的溶液，即为对照品溶液，精密量取对照品溶液1.5ml替代供试品，同法操作，测定吸光度(A2)。A1读数不得大于A2。 2.空白试验：除了将供试品换成蒸馏水外，其余操作相同。; 利用凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术结合的实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽，将抗体加入沟槽内，使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状，以分析标本中所含组分的性质。 ;沉淀线的分析; 溶液的渗透压，依赖于溶液中溶质离子的数量，是溶液的依数性之一，通常以渗透压摩尔浓度（Osmolality)表示，它反映的是溶液中各种溶质对渗透压贡献的总和。血液渗透压决定血液中细胞膜两侧水份的转移，正常的血液渗透压对于维持红细胞的体积和形态正常具有重要作用。 通常采用测量溶液的冰点下降来间接测定其渗透压摩尔浓度。 原理： 在理想的稀溶液中，冰点下降符合ΔTf=Kf·m 的关系，式中，ΔTf 为冰点下降值