傷寒沙门菌野生型综述.doc

伤寒沙门菌野生型综述 以铜绿假单胞菌的野生型标准株 PA 01的 gyrA (GenB ank accession num 2ber L29417 ), parC ( GenB ank accession num berAB003428)基因序列为靶序列 ,以 DNA M AN 软件辅 【作者简介 】徐苏娟，J检验0706，,371113147 【摘要 】 目的 探讨环丙沙星 (C IP)耐药的铜绿假单胞菌临床分离株主动外排药物与 gyrA,parC 基因突变的关系. 方法 联合碳酰氰基 2对 2氯苯腙 (CCCP)和 C IP对 C IP耐药的铜绿假单胞菌株进行主动外排阳性株和阴性株的筛选 ,并对这些菌株的 gyrA,parC 基因进行聚合酶链式反应 2限制性片段长度多态性分析 (PCR 2RFLP).结果57% (55/97)的 C IP耐药菌株最小抑菌浓度 (M IC)可被逆转 ,gyrA 单基因突变率为 65% ,gyrA 和 parC 双基因突变率为 35% ,未发现 parC单基因突变的菌株.主动外排阳性组与阴性组 gyrA,parC基因突变情况差异无显着性. 结论 在本地区铜绿假单胞菌对 C IP的耐药机制中 ,主动外排系统表达上调与抗菌药物作用靶位的改变均占有重要的地位 ,两者可能是并存的两种相对独立的机制. 【关键词 】 环丙沙星耐药 ;铜绿假单胞菌 ;主动外排 ;基因突变 铜绿假单胞菌 (Pseudom onas aeruginosa,Pa)在自然界分布广泛 ,对人类而言 ,属于条件致病菌.随着抗菌药物,免疫抑制剂和各种侵袭性诊治方法的广泛应用 ,铜绿假单胞菌已成为医院感染的主要病原菌之一.由于该菌对多数抗生素不敏感 ,呈现明显的固有耐药 ,即使对原为敏感的抗生素也容易产生耐药性 ,因此该菌在临床抗感染治疗中有着特殊重要的地位.喹诺酮类 (quinolones)药物以环丙沙星 (ciprofloxacin,C IP)为代表 ,因其良好的药代动力学特点,强大的杀菌活性被广泛用于临床铜绿假单胞菌感染的治疗.但随着该类药物的大量使用 ,临床上对其耐药的铜绿假单胞菌逐渐增多 ,给治疗带来极大的困难.铜绿假单胞菌的耐药机制较为复杂 ,大量的研究表明 :细菌编码喹诺酮类药物作用靶位的 DNA 促旋酶和拓扑异构酶 IV 的基因突变是细菌对喹诺酮类药物的主要耐药机制之一 [1] .近年来的研究发现 ,铜绿假单胞菌内存在着外排多种物质的主动外排系统 ,在多药耐药性 (m ultidrug resistance,M DR )中起着极其重要的作用 [2] .同时也有研究显示 :调节主动外排系统的 m exR,nfxB 基因突变仅出现在 gyrA 或 parC 基因突变的基础上 ,进而导致铜绿假单胞菌的高度耐药 [3] .碳 酰 氰 基 2对 2氯 苯 腙 (Carbonyl Cyarude232chlorophcnylhydrazone,CCCP)是最典型的质子泵抑制剂 ,是一种抑制质子运转的解偶联剂 ,它通过抑制主动外排系统能量来源的质子浓度梯度 ,从而破坏主动外排系统外排药物的作用 ,能显着降低耐药菌对药物的最 小 抑 菌 浓 度 (m inim al inhibitory concentration,M IC),是检测主动外排系统存在的重要试剂 [4] 本文利用 CCCP对 C IP耐药的铜绿假单胞菌M IC的这种逆转作用 ,将 97株 C IP耐药菌分为主动外排阳性组,阴性组 ,并对其 gyrA,parC 基因进行PCR 2RFLP分析 ,通过对比两组结果 ,了解主动外排系统表达上调,抗菌药物作用靶位的改变这两种耐药机制在临床分离耐药株中的地位以及两者的关系. 1 材料与方法 1.1 菌株来源及鉴定 97株 C IP耐药的铜绿假单胞菌均为广州医学院第一附属医院,中山大学附属第二医院,广州市第一人民医院住院及门诊临床分离的菌株 ,经法国 B ioM érieu公司 V ITEK22全自动细菌鉴定药敏分析系统鉴定 ,且环丙沙星 M IC ≥4μg/m l.质控菌株为铜绿假单胞菌 A TCC 27853. 1.2 主要试剂与仪器 M H 琼脂粉 (O xiod公司 ),C IP(广州南新制药厂 ),CCCP (Sigm a公司 ),基因组DNA 提取试剂盒 (北京赛百盛基因技术有限公司 ),引131中国微生态学杂志 2008年 4月第 20卷第 2期物 (上海英骏生物技术公司合成 ),Taq酶 (TaKaRa公司 ),SacⅡ酶 (TaKaRa公司 ),H infⅠ酶 (TaKaRa公司 ).主要仪器 :恒温摇床 (上海离心机械所 ),式高速离心机 (Sigm a公司 ),PCR扩增仪 (B iom et