纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析-食品科学.pdf

※生物工程 食品科学 2017, Vol.38, No.14 1 纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析 崔 青，钱炳俊，姚晓敏，季顺利，鲁飞凤，吴 静，张建华* （上海交通大学农业与生物学院，陆伯勋食品安全研究中心，上海 200240 ） 摘  要： Bacillus subtilis natto aprN 纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌（ ）的 基因编码，在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活 polymerase chain reaction PCR B. subtilis natto aprN B. subtilis 性。利用聚合酶链式反应（ ， ）技术扩增 的 基因，并依据 30 pHT01-aprN PCR 的密码子偏好性优化了起始 个氨基酸的密码子，构建了重组表达质粒 。经限制性酶酶切、 扩增 和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B. subtilis ，利用氯霉素抗性筛选获 B.s 168/pHT01-aprN IPTG 289.00 3.42 U/mL 得 工程菌。经 诱导表达，摇瓶发酵培养最高酶活力为（ ± ） ，是野生菌的 3.9 倍，酶活力表达稳定性良好。 关键词：纳豆激酶；aprN基因；枯草芽孢杆菌；基因工程菌；酶活力 Construction of Genetically Engineered Strain for Nattokinase Production and Enzyme Activity Analysis * CUI Qing, QIAN Bingjun, YAO Xiaomin, JI Shunli, LU Feifeng, WU Jing, ZHANG Jianhua (Bor S. Luh Food Safety Research Center, School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China) Abstract: Nattokinase (NK), encoded by the aprN gene of Bacillus subtilis natto, has strong fibrinolytic activity both in vitro and in vivo. In this research, the aprN gene from B. subtilis was cloned and the codons which encode the first 30 amino acids were optimized on the basis of the codon preference of B. subtilis . Recombinant vector pHT01-aprN was constructed. Throug