MBL高表达细胞株筛选及其产物生物学特性研究的开题报告.docx

MBL高表达细胞株筛选及其产物生物学特性研究的开题报告 一、研究背景和意义： MBL (mannose-binding lectin)是一种识别微生物病原体表面糖类的血浆蛋白，是体内天然免疫系统中的重要成分，可激活经典途径的补体系统，促进病原体的清除。目前已有研究表明，MBL与许多疾病的发生发展密切相关，如感染、自身免疫病等。因此，开展MBL产物生物学特性研究具有一定的理论与应用价值。 二、研究内容和目标： 本次研究将从血液中筛选出MBL高表达的细胞株，并分离提取MBL产物，对其进行物理化学性质分析、生物活性测定和结构确定等方面的研究，旨在揭示MBL在体内天然免疫系统中的作用机制及其在疾病预防与治疗中的应用前景。 三、研究方法： 1.血样采集：收集志愿者血样，分离PBMC后分离出B细胞，用多聚酶链式反应（PCR）扩增MBL基因。 2.重组质粒构建：将PCR扩增的MBL基因片段插入表达载体pET-28a(+)中，构建MBL表达质粒。 3.细胞转染：将表达质粒转染至CHO细胞中，经过筛选，得到MBL高表达的细胞株。 4.MBL产物分离与提取：采用亲和层析柱和蔗糖密度梯度离心法等方法，纯化MBL产物及其变体。 5.生物学特性研究：对MBL产物进行物理化学性质分析，如分子量测定、同工酶分析、紫外光散射分析等，并进行生物活性测定、如补体活化活性测定、细胞因子诱导实验等；同时，利用X射线晶体学等技术，对MBL的结构进行分析。 四、研究预期结果： 本次研究将通过筛选出MBL高表达的细胞株及分离提取MBL产物，揭示MBL在体内天然免疫系统中的作用机制，提高对MBL的认识。同时，对MBL产物进行生物学特性研究，为其在疾病预防与治疗中的应用提供理论和实验基础。