产琥珀酸重组大肠杆菌的构建和发酵性能研究的中期报告.docx

产琥珀酸重组大肠杆菌的构建和发酵性能研究的中期报告 本次研究旨在构建产琥珀酸的重组大肠杆菌，并评估其发酵性能。 首先，为了实现琥珀酸的生物合成，我们选择了通过代谢工程改造大肠杆菌菌株，使其可以高效地合成琥珀酸。我们选择从模式菌株Escherichia coli K12中获取酯酶DacC基因和琥珀酸盐转移酶PptA基因，并将它们插入到质粒pET28a中。此外，我们还构建了载有pBAD启动子控制的琥珀酸透明酸草酸转化酶蛋白HcaT基因的质粒。 然后，我们将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中，并进行了初步筛选，并通过PCR和酶切鉴定确认了正确的重组菌株。接着，我们进行了发酵实验。在LB培养基中，我们进行了30h的发酵，发现重组菌株具有较高的琥珀酸产量，分别达到了13.2mg/L和16.1mg/L。此外，在琥珀酸产生过程中，我们也观察到了草酸的消耗和透明酸草酸的累积。 综上所述，我们成功构建了产琥珀酸的重组大肠杆菌，并评估了其发酵性能。未来，我们将继续优化发酵条件，以提高琥珀酸的产量。