基于SSR分子标记的玉米多重PCR扩增体系的建立.pdf

维普资讯 分子植物育种，2007年，第 5卷，第 6(S)期，第 169-172页 MolecularPlantBreeding，2007，Vo1．5，No．6(s)，169—172 新思路、新技术、新方法 NovelThinkingTechnology 基于 SSR分子标记的玉米多重PCR扩增体系的建立 孙艳美 。工 王风格 -赵久然 -． 易红梅- 匡猛- 于新艳 - 王璐 - 1北京市农林科学院玉米研究中心，北京，100097；2首都师范大学，北京，100037 通讯作者，jiuran@263．net 摘 要 本实验 以l0个入选组多重的引物作为研究对象，探讨了适用于玉米DNA指纹库构建的多重PCR 复合扩增体系的建立，分析了影响多重PCR组合建立的主要因素，包括引物扩增片段范围，引物间的相互作 用，引物间主带与非特异带的相互影响，并提出了构建多重PCR扩增体系应该遵循的重要原则。 关键词 玉米，SS 多重PCR ConstructionofMultiplexPCR ofMaizewithSSRM arkers SunYanmei。。 W angFengge。 ZhaoJiurna 。’ YiHongmei。 KuangMeng。 YuXinyan。 WnagLu。 1MaizeResearchCenter,BeijingAcademyAgrieultur~andForestrySciences，Beijing，100097；2Capi~NormalUniversity,acijhag，100089 Correspondingauthor,jiuran@263．not Abstract InthisresearchweattemptedtoestablishedthemultiplexSSR-PCR system thatmightbesuiatblefor maizeDNA fingerprintingconstructions．Tencnadidateprimersnadsixleadingmazieinbreedinglnieswereem- ployedot explorehtemainlyfactors whichwouldpossibleinfluenceonconstructingmultiplexPCRcombniation， suchashteamplifyingrnageofhteprimercombniations，hteniteractionma onghteprimers，hteinfluencebetween htespecificbnadnadnon-specificbnadma onghteprimers．Thenwehadsomesuggestionsofresatblishingmulti- plexPCRcombination． Keywords Mazie(Zea／／1a~$L．)，SS MultiplexPCR SSR(simplesequencerepeat)简单序列重复，亦 1988有人首次提出这一概念 以来，该技术已成功地 称微卫星DNA (microsatelliteDNA)是近年来发展起 应用到DNA检测的各个领域。目前，四色荧光技术 来的建立在PCR基础上的第二代分子标记，它是一 与多重PCR技术相结合，可以在一个反应中同时扩 类短的串连重复序列基序(1~6个核苷酸)组成的简 增多达 l2～l5对不同引物。毛细管电泳技术与多重 单重复序列，均匀地分布在整个真核生物基因组中， PCR技术相结合，使基因分型效率提高一倍，使结果 侧面有保守的DNA序列 (铁双贵和郑用琏，2001)。 更精确可靠 (庄启南等，2002)。本研究在王风格等 SSR标记具有共显性、高度可重复性和高度丰富的 (2006)关于玉米SSR核心引物筛选和构建多重PCR 多态性等优点，是构建遗传连锁图谱、DNA指纹图 扩增体系的研究基础上，探讨了适于玉米DNA指纹 谱、研究群体遗传学、进行分子标记辅助育种、系谱 库构建的多重PCR体系建立的主要过程，对于在具 分析和法医鉴定的理想工具。目前玉米上已公开的 体试验验证 中遇到的问题进行分析，总结了构建多 SSR引物序列已达 1900多对，并且每隔一段时间就 重 PCR组合应该遵循的重要原则。 有新的引物增加，为该技术在玉米DNA指纹图谱中 的应用提供 了良好的条件 。 1材料与方法 多重 PCR (multiplexPCR,M．PCR)是在普通