微滴度pcr(ddpcr)原理和应用.pdf

第三代PCR技术——ddPCR的原理和医学应用 ddPCR droplet digital PCR 微滴式数字PCR 陈燕飞，Ph.D. Field Application Specialist, Bio-Rad Laboratories 主要内容  ddPCR的基本原理  ddPCR的技术特征  ddPCR的医学介绍 （ddPCR ，droplet digital PCR ，微滴式数字PCR ） 主要内容 ddPCR的基本原理 （什么是数字PCR ？什么是微滴式数字PCR / ddPCR? ） PCR技术的发展历程（1983-2015年） 第一代 第二代 第三代 更灵敏 更准确 更精确 T100 Thermal Cycler CFX96/384 Real-time PCR QX200 Droplet Digital PCR 普通PCR Real-time PCR 数字PCR 定性分析 间接定量分析 直接定量分析 （依赖C 或C 值，标准品） （无需标准品，绝对定量） t q 第三代PCR技术——数字PCR （digital PCR, dPCR） 基本原理：0或1的反应 （以ddPCR为例） 泊松分布 : 靶标分子 ●: 阳性微滴（1） ○: 阴性微滴（0） : 背景分子 有限稀释 PCR扩增 泊松分布 一个 成千上万个 阴性微滴比例推算 待分析的PCR反应体系 独立的PCR反应体系 起始靶分子的绝对量 数字PCR的核心思想 1992年数字PCR思想的提出 Alec Morley 利用有限稀释，终点PCR和泊松分布实现核酸浓度的绝对定量 The combination of limiting dilution, end-point PCR, and Poisson statistics could yield an absolute meas