基因诊断和基因治疗—.ppt

基因诊断和基因治疗;概念：;基因病分为三大类：;第一节 基因诊断 （DNA diagnosis）;基因诊断定义（概念）：;基因诊断的特点：;基因诊断的基本概况：;二、基因诊断的对象;肿瘤的发生：; （1）用核心顺序的串联重复序列组成探针进行杂交研 究，可同时检出具有高度多态性位点。 （2）用southern 杂交得到DNA指纹图谱;基因诊断的基本策略：;2、检测与某种遗传标志连锁的致病基因;3、检测表型克隆基因;基因诊断的基本步骤：;三、基因诊断的常用技术;1、核酸分子杂交;核酸分子杂交－－核酸印迹杂交;核酸印迹杂交基本过程：;核酸印迹杂交基本过程：;核酸印迹杂交基本过程：;核酸印迹杂交基本过程：;2、聚合酶链反应（PCR);耐高温DNA聚合酶－－－Taq酶;;基因诊断中常用的PCR技术：;（4）、多重 PCR：;其他重要的PCR衍生技术;3、限制性片段长度多态性（RFLP）;RFLP类型：;（四）扩增片段长度多态性（AFLP）;AFLP原理：;5、等位基因特异的寡核苷酸（ASO）;6、单链构象多态性（SSCP）;PCR-SSCP基本过程;7、基因芯片;基因芯片技术：;目的：检测外源性基因的侵入;艾滋病与HIV病毒;艾滋病与HIV病毒;非典型性肺炎（SARS）;2、在遗传病检测中的应用;3、在肿瘤检测中的应用;癌基因激活变化及检测：;抑癌基因的检测：Southern PCR;肿瘤标志物：指特征性存在于恶性肿瘤或由恶性肿瘤细 胞异常产生的物质或宿主对肿瘤反应而产 生的物质。;法医学鉴定;DNA指纹（图谱）分析：;第二节 基因治疗（gene therapuy);基因治疗策略:;1、基因矫正－－将致病基因的碱基进行纠正，而正常部分予以保留。;6、调节性基因治疗： 导入编码调控蛋白的基因，治疗 基因表答异常的疾病;基因治疗基本程序;;治疗基因的来源：;用于基因治疗的基因应满足以下条件： ;理想的载体具有以下特征：;基因载体：;病毒介导的基因转移;逆转录病毒结构:;逆转录病毒生活周期:;逆转录病毒;构建逆转录病毒载体：;逆转录病毒载体的缺陷：;腺相关病毒(AVV );骨髓细胞、皮肤成纤维细胞、肝细胞、血管内皮细胞、肌细胞;;方法：;转染细胞后的筛选：;方法： （目的基因和标记基因???表达）;6、回输体内;1、肝专一性表达： 磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶启动子;基因治疗的应用及展望;呈待解决的问题：;; 使用巢式引物进行连续多轮扩增可以提高特异性和灵敏度。第一轮是15 到20 个循环的标准扩增。将一小部分起始扩增产物稀释100 到1000 倍加入到第二轮扩增中进行15 到20个循环。或者，也可以通过凝胶纯化将起始扩增产物进行大小选择。在第二轮扩增中使用一套巢式引物，其可以同第一套引物内侧的靶序列结合。巢式PCR 的使用降低了扩增多个靶位点的可能性，因为同两套引物都互补的靶序列很少。而使用同样的引物对进行总数相同的循环（30 到40）会扩增非特异性靶位点。巢式PCR 可以增加有限量靶序列（如稀有mRNA）的灵敏度，并且提高了困难PCR（如5 RACE）的特异性。