第三章 cDNA文库和基因组文库.ppt

第三章 cDNA文库和基因组文库 第一节 cDNA文库的建立与基因的分离 第二节 基因组文库的建立与基因的分离; 来源 大小 应用;第一节 cDNA文库的建立与基因的分离; 利用oligo（dT）引物和反转录酶合成cDNA第一链; 自身引导法合成双链cDNA; 双链cDNA的置换合成; 同聚物加尾法克隆双链cDNA; 通过依次加入、连接 合成的DNA衔接物 进行cDNA克隆; 用衔接物分子连接平末端的DNA片段;衔接物（linker） 指用化学方法合成的一段由10-12个核苷酸组成，具 有一个或数个限制酶识别为点的平末端寡核苷酸短 片段 缺点： 酶切可能切断cDNA 对策： 利用切点稀少的限制酶 甲基化;接头（adapter） 是一类人工合成的一头具有某种限制酶粘性末端， 另一头为平末端的特殊的寡核苷酸片段。 可能问题： 接头自身连接 解决方法： 接头分子一端磷酸化; 具异常的5’-OH粘性末端结构的BamHⅠ接头的连接机理;第二节 基因组文库的建立与基因的分离; 构建真核DNA随机片段文库的策略; 不经分级分离的基因组DNA文库的构建;优点： ①载体不互补，抑制自身连接 ②基因组DNA不互补，稍短的片段极不可能连接成带有原基因组上非相邻DNA区段的结构 ;