HIV抗体检测技术讲解幻灯片.ppt

HIV抗体检测技术;艾滋病病毒的形态;HIV的逆转录酶缺乏3’—5’核酸外切酶活性 ， 无法修复逆转录和复制过程中发生的错误 。;HIV生活周期; ;HIV感染后的血清学改变;艾滋病诊断的特殊性 ;筛查试验 初筛 复检 确证试验 ;筛查试验;;;筛查方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验（CLIA）： 采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪 测定结果。 快速检测（RT）及其它检测试验 (1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 (3)免疫层析试验;(1)酶联免疫吸附试验（ELISA）; ;;ELISA法结果判断;四代艾滋病酶联免疫试剂比较;酶联免疫吸附试验（ELISA）;(2)化学发光或免疫荧光试验;（3）快速检测（RT）及其它检测试验;;（1）明胶颗粒凝集试验（PA） 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。;PA法原理;PA法操作步骤;PA法;（2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒） 以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上,加血清样品。 斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。;金标诊断试验原理;快速诊断试验;（3）免疫层析试验(金标法、硒标法) 以硝酸纤维膜为载体。 加样区：预包被胶体金-抗原/胶体金-protein A结合物 测试区（T）：固定有重组HIV抗原， 质控区：抗HIV单克隆抗体/抗-protein A抗体;全血样品 加50ul样品于样品垫中 ;;病人条;快速诊断试验;优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在10～30分钟内得出结果。 缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。 注意：一定要将试剂平衡至室温;HIV抗体确认试验;HIV抗体确认实验结果;HIV核酸定性检测 ;HIV RNA定量测定（病毒载量测定） ;HIV核酸定量检测的意义;适用范围： ★HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断； ★ HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断； ★第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断； ★监测病程进展和抗病毒治疗效果。 检测方法：通常是采用ELISA双抗体夹心法。 ; 结果报告和解释 ;样　　本;筛查试验阳性反应样品; HIV抗体检测的要点 1、根据目的选择检测方法及检测策略。 2、严格遵守实验室SOP。 3、筛查试验阳性，须作确证实验。 4、筛查试验阴性，不应做确证实验。 5、筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。 ;;婴幼儿HIV感染的抗体检测;;谢谢！