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HIV抗体检测技术简介.ppt

发布:2018-09-14约7.41千字共37页下载文档
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* HIV抗体确证检测 HIV抗体确证是目前国际上通用的对样品中血清学检测HIV 抗体阳性结果的最终评价。它是应用高特异性试剂来证实和判断HIV抗体初筛阳性反应是由于真的HIV-1和/或HIV-2感染引起,还是由于非特异性交叉反应或与HIV感染无关的其它因素所致。根据国家卫生部规定,HIV抗体阳性报告必须由卫生部认证并取得资格的HIV抗体确证实验室出具才有法律效应。 常用的HIV抗体确证实验方法有免疫印迹法(Western Blot,WB),条带免疫印迹法(Strip Immunoblot Assay 或 Linear Immunoblot Assay,SIA 或LIA),免疫荧光法(Immunofluorescence Assay,IFA)和放射免疫沉淀法(Radioimmunopreciptation Assay,RIPA)。其中以WB法最常用,而后二种在我国极少使用,在此不作详细介绍。 * 免疫印迹实验(WB) 原理:HIV-1纯培养物经灭活和裂解处理后在SDS凝胶上电泳,不同分子量的HIV-1抗原在凝胶中的泳动速率不同而被分离。通过电转移等方法将凝胶中的抗原转印至硝酸纤维素膜上(如为HIV-1/2混合型试剂还需在硝酸纤维素膜上的适当位置喷涂基因重组或合成的HIV-2抗原多肽),含HIV抗原的条膜与适当比例稀释的待检血清(浆)样品共同孵育,如样品中含有HIV-1和/或HIV-2特异性抗体则与条膜 上一定位置的相应HIV抗原分子结合,在膜上形成HIV抗原-HIV抗体复合物。洗涤除去未结合物质,加入酶标记抗人免疫球蛋白,形成HIV-抗原-HIV抗体-酶标记抗人免疫球蛋白复合物,再次洗涤后加入反应,在HIV抗体与相应HIV抗原分子结合位置处出现肉眼可见的呈色条带。 * HIV抗体确证实验结果评价(1) 阳性:至少一条env带(gp41、gp120、gp160)和一条pol带(p65、p51,p32)。 至少一条env带和一条gag带(p55、p24、p18)。 至少一条env带和一条gag带和一条pol带。 至少两条env带。 阴性:无上述反应条带 可疑:只有gag带和pol带,无env带 * HIV抗体确证实验结果评价(2) HIV抗体不确定(或可疑)结果的评价: 在某些情况下,有些初筛阳性或阴性样品的HIV抗体确证实验可出现不典型的HIV抗体反应性条带图谱,既不能确定为阳性也不能确定为阴性,称为HIV抗体不确定(Indeterminant)或可疑阳性。该现象的出现频率通常取决于所分析的人群类型和/或选择用于免疫印迹实验人群的筛选方法。此时应每3个月追踪随访一次,共2次,如为阴性或仍为不确定结果,则按阴性结果报告;如出现阳转,则按阳性结果报告。 * HIV抗体确证实验结果评价(3) 可能导致HIV抗体不确定结果出现的原因: ①HIV早期感染,此时可能仅出现一条env带,或p24、 p31、p55带; ②非特异反应,如在高丙球蛋白血症、某些病毒性疾 病和寄生虫感染、自身免疫性疾病等情况下可出现 该现象; ③少数晚期艾滋病患者; ④与HIV裂解物中的宿主细胞成分发生交叉反应。 * HIV抗体确证实验结果评价(4) HIV-1与HIV-2交叉反应和HIV-2抗体确证: 1、HIV-2主要在西非国家流行,但目前已扩散到世界上许多国家,近年来我国在非洲劳务输出回国人员和旅游者中也发现了少数HIV-2感染个案。 2、HIV-2抗原主要为env基因编码的gp140、gp105、gp36,gag基因编码的p56、p26、p16,pol基因编码的p68、p34。HIV-2 gag和pol基因与HIV-1的同源性为60%,env基因差异较大,二者的同源性约为35-40%。因此,HIV-1和HIV-2在血清学上有一定的交叉反应性。 3、目前市售HIV-1/2混合型初筛和确证试剂大部分是将gp36和/或gp105重组蛋白或合成多肽与HIV-1抗原一起包被在固相载体或喷涂在印迹条膜上,可同时检测HIV-1和HIV-2型抗体。 * HIV抗体确证实验结果评价(5) HIV-1 O亚群的检测: HIV-1 O亚群的基因型和表现型均与已知HIV-1 A-J亚型(简称HIV-1 M群)和HIV-2存在较大差异,因此,常规的HIV-1 M群和/或HIV-2试剂和检测方法在筛查HIV-1 O 亚群阳性血样时有较高的漏检率,且用一般的WB试剂检测时通常为不确定结果。目前部分试剂供应商已将基因重组或合成HIV-1 O亚群特异性抗原混合包被在固相载体上 (HIV-1/2 plus O试剂)或喷涂在印迹条膜上(如Organon公司生产的LiaTek HIV Ⅲ试剂盒),从而可同时检测HIV-M群、O亚群和HIV-2型抗体。
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