肝肿瘤细胞DNA倍体分析中选择参照细胞核的依据.PDF

维普资讯 · 262 · JournaIofPracticaIOncologyVo1．17 No．42002 肝肿瘤细胞 DNA倍体分析 中选择 参照细胞核的依据 魏清柱 ，王凤岩 ，夏潮 涌，黄 中新 ，覃 莉 ，饶 晓黎 ，黄华梅 (暨南大学医学 院组织胚胎学教研室 ，广 东 广州 510632) 摘 要 ：目的 利用细胞 图像分析仪测量小 鼠肝细胞涂片的DNA含量 ，探讨细胞图像光度术(ICM)和流式细 胞光度术 (FCM)分析肝肿瘤细胞核 DNA倍体时，选取参照细胞核 的原则 。方法 本文选取 1O只成年健康雄性小 白鼠的肝组织涂片，Feulgen染色 ，TIGER细胞 图像分析仪测量单个完整肝细胞核 的DNA含量与倍体 。结果 (1) 不 同小 鼠同一倍体 的肝细胞核 DNA 含量大致相 同；(2)二 、四 √ 和十六倍体肝细胞单个核 DNA含量间的比值接 近 2、4、8，它们 的CV8．0 ；(3)当仅 出现二倍体和 四倍体时，以二倍体 的细胞核为主 (80．4 )，伴随八倍体和十 六倍体 的出现 ，四倍体肝细胞核所 占百分率大于二倍体 。结论 由于肝细胞具有多核和多 DNA倍体 的特点 ，分析 和计算肝脏肿瘤细胞核 DNA倍体 和其它指标时 ，不能简单地遵循 以同种属、同个体 、同源 的正常二倍体肝细胞核 作为参照细胞核 ，正常 四倍体和八倍体甚至十六倍体肝细胞核作为参照细胞核也应该加 以考虑 。 关键词 ：肝肿瘤／病理学 ；DNA，肿瘤；流式细胞术；倍性 ；图像介释 ，计算机辅助 中图分类号 ：R735．7 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—1692(2002)04—0262-03 流式细胞仪和图像分析仪 已被广泛地应用于检 1．3 肝细胞核参数 的测量 按柯勒 照明要求调整 测肿瘤细胞核 的DNA含量与倍体[1]。由于分析肿 0LYMPUSBX50多功 能显微镜光源 ，使用 2O×物 瘤细胞核 DNA干系倍体时，最好选择与肿瘤组织 镜 (NA 0．5)随机摄取肝细胞涂片的聚焦 图像 (每一 为 同一个体 的同源的正常组织细胞核作为二倍体参 小 鼠不少于 10帧 ，细胞核总数不少于 500个)，按 考细胞 [3]，这适用于细胞核的DNA含量 以二倍体 TIGER细胞 图像分析仪测量光密度 的操作要求 ，测 为 主 的组织 。众所周知 ，肝细胞具有 多核和 多种 量肝细胞核 的面积积分光密度 (IOD)和面积 (A)等 DNA倍体 ，所 以，如何科学地选择参照细胞核分析 参数 ，分别计算 2、4、8和 16倍体细胞核 的 IOD均 肝细胞肿瘤 的DNA干系倍体 ，值得研究 。本文将小 值 及其 CV 值 ，以 IOD 均值 作 为各 倍 体 细胞 核 鼠肝脏制成肝细胞涂片，利用 TIGER细胞 图像分 DNA含量 的代表值 。 析仪测量和分析涂片上单个肝细胞核 的DNA含量 与倍体 ，探讨分析肝细胞肿瘤 DNA 干系倍体时选 2 结 果 择参照细胞核 的依据 。 涂片内的肝细胞单个核分布均匀 ，轮廓清 晰 ，呈 紫红色 。表 1为每 只小 鼠肝细胞涂片 内各 DNA 倍 1 材料与方法 体肝细胞单个核 的百分率 。 1．1 取材和制 片 正常成年雄性 昆明小 鼠 1O只 ， 表 1结果显示 ，三 只小 鼠只有 DNA 含量为二 断髓 ，开腹 ，经 门静脉灌注后 ，机械法分离肝细胞 ，制 倍体和 四倍体 的肝细胞单个核 (占肝细胞单个核总 成肝细胞悬液 ，涂片 ，室温干燥后 ，4 中性 甲醛溶液 数