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生物学实验常用技术
一、分子方面
1、基因工程2、蛋白质工程
1)PCR1)蛋白收集
(PolymeraseChainReaction)(蛋白裂解液+PMSF;
(二楼PCR仪器全部会用)1×Loading裂解(推荐))
2)RT-PCR;Q-PCR2)SDS(电泳胶的配制)
3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收2)考马斯亮蓝染色,银染
4)酶切/链接3)Westernblot
5)转化4)蛋白定量常用的方法及原理,
6)固体/液体LB培养基配制以及熟练操作Bradford法蛋
(高压蒸汽灭菌锅使用方法)白定量
7)质粒大/小抽原理及步骤
(手提、溶液I、II、III作用)
8)基因组DNA抽提
9)RNA提取;
(TRIZOL法原理、注意事项及步骤)
二、细胞方面
1)细胞培养、传代
2)细胞冻存与复苏
冻存液配制:(1)DMSO:血清=1:9(推荐)
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(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6均可
DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不
要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。
3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不
同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次)
4)转染
5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率)
6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化)
(5、6需学会SPSS软件及graphpadprism5软件使用)
7)Hoechst染色
8)结晶紫染色(不推荐)
9)苏木精/伊红染色
(9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮)
10)荧光显微镜的使用
11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱)
(7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据)
12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪
器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果)
三、动物实验
1)小鼠的定制:
常见的小鼠:
ICR小鼠(正常),9元/只
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BalB/C小鼠(正常),30元/只
SD大鼠(正常),30元/只
裸鼠(免疫缺陷小鼠),80元/只
NODSCID小鼠(免疫三缺陷),250元/只
其中前四种就是常用的,最后一种以后可能会用到。
浙江中医药大学:小鼠品系齐全,可提供以上小鼠静脉注射,提供体内原
位成瘤手术;杭州师范大学:NODSCID品系小鼠没有,不提供裸鼠静脉