蜡样芽胞杆菌检测.ppt

在营养肉汤中32℃培养3d后，芽胞形成率在90％以上，80℃-85 ℃水浴5min-10min可刺激芽胞萌发。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下： 冰箱：2 ℃-5 ℃; 恒温培养箱：30 ℃±1 ℃、36 ℃±1 ℃; 均质器; 电子天平：感量0.1 g ; 无菌锥形瓶：100 mL、500 mL; 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头; 无菌平皿：直径90 mm; 无菌试管：18 mm×180 mm; 显微镜：10倍-100倍（油镜）; L涂布棒。 观察有无游离芽胞（浅红色）和染成深红色的菱形、正方形或其它形状的蛋白结晶体。如发现游离芽胞形成的不丰富，应将培养物置室温2 d～3 d再行检查。放置3d～4d以上的苏云金芽胞杆菌培养物有大量的结晶体，但是只有在芽胞裂解通过上述染色方法才能见到。然而，除非见到芽胞，否则培养物应在室温继续放置几天以重新检查毒素晶体。其它芽胞杆菌不产生蛋白质毒素晶体。 如果： a）只有一个稀释度的平板菌落数在20 CFU～200 CFU之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落； b）所有稀释度的平板菌落数均小于20 CFU且有典型菌落，应计数最低稀释度平板上的典型菌落； c）某一稀释度的平板菌落数大于200 CFU且有典型菌落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度平板上的典型菌落； d）若所有稀释度的平板菌落数大于200 CFU且有典型菌落，应计数最高稀释度平板上的典型菌落； e）若所有稀释度的平板菌落数均不在20 CFU-200 CFU之间且有典型菌落，其中一部分小于20 CFU或大于200 CFU时，应计数最接近20 CFU或200 CFU的稀释度平板上的典型菌落。 以上按公式（1）计算。 f）若2 个连续稀释度的平板菌落数均在20 CFU-200 CFU之间，按公式（2）计算。 4.4.1.2从典型菌落中至少挑取5个典型菌落（小于5个全选），划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。 4.4.2 计算公式 4.4.2.1 公式（1） T=AB/Cd (1)式中： T——样品中蜡样芽胞杆菌菌落数； A——某一稀释度蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数； B——鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数； C——用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数； d ——稀释因子。 公式（2） )式中： T ——样品中蜡样芽胞杆菌菌落数； A1——第一稀释度（低稀释倍数）蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数； A2——第二稀释度（高稀释倍数）蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数； B1——第一稀释度（低稀释倍数）鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数； B2——第二稀释度（高稀释倍数）鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数； C1——第一稀释度（低稀释倍数）用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数； C2——第二稀释度（高稀释倍数）用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数； 1.1——计算系数（如果第二稀释度蜡样芽胞杆菌鉴定结果为0，计算系数采用1）； d ——稀释因子（第一稀释度）。 8 结果报告 根据MYP平板上蜡样芽胞杆菌的典型菌落数，按公式计算，报告每g（mL）样品中蜡样芽胞杆菌菌数，以CFU/g(mL)表示；如T值为0，则以小于1乘以最低稀释倍数报告。 蜡样芽胞杆菌MPN计数法（第二法） 10.1-10.3 样品处理、样品制备和样品稀释同平板计数法 10.4 样品接种 取三个适宜连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），接种于10 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中，每一稀释度接种3管，每管接种1 mL（如果接种量需要超过1 mL，则用双料胰酪胨大豆多粘菌素肉汤）。 于30 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。 10.5 培养 用接种环从各管中分别移取1环，划线接种到MYP琼脂平板上，30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。如果菌落不典型,可继续培养24 h±2 h再观察。 10.6　确证实验 从每个平板选取至少5个典型或可疑菌落，划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，进行确证实验。 11　结果报告 MPN计数结果报告方式：根据证实为蜡样芽胞杆菌阳性的试管管数，查MPN检索表，报告每g（mL）样品中蜡样芽胞杆菌的MPN值。 注意事项 MPN法法可以弥补样品中蜡样芽胞杆菌带菌量少于103 cfu/mL时用平板计数法计数不准的问题，同时该方法操作与现行大肠菌群的操作类似，容易推广使用。 某些不适合用平板计数法的脱水淀粉类食品也可用此法检验。 * * * * * * * * 蜡样芽胞杆菌平板计数法（第一法） 4 检验程序 5 操作步骤 5.1 样品处理 冷冻样品应在45℃以下不超过15 min或在2