生长因子对原代胚胎干细胞的影响(精选).doc

几种因素对原代昆明小鼠ESC形成和增殖的影响 陈世彬1，2，赵云程1，况玲2，汪立芹1，叶小芳1，侯敏1，2，黄俊成1* （1新疆畜牧科学院农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室，新疆乌鲁木齐830000；2新疆农业大学，新疆乌鲁木齐 830052，） 摘要：本实验研究三种细胞因子（LIF、EGF、bFGF）、两种药物（SU5402、和肝素钠）、氧分压（5%O2，20%O2）以及温度（37℃、39℃）等因素对原代昆明系小鼠胚胎干细胞（KM-ESC）的影响。将昆明系小鼠囊胚培养在胚胎干细胞培养液中，4天后观察集落形成率，测量原代集落的直径大小。结果发现几种细胞因子和肝素钠对原代KM-ESC的增殖的都有一定促进作用(P0.01)，作用大小顺序为LIF肝素钠EGFbFGF；SU5402对KM-ESC没有明显的作用；20%O2的有利于原代KM-ESC集落的形成和增殖；温度39℃更加有利于原代KM-ESC集落的形成和增殖，差异极显著（P0.01）。 关键词： 昆明系小鼠；胚胎干细胞；细胞因子；氧分压；温度 Effect of Several Factors on generation of primary Kunming Mouse ESC CHEN Shi-bin1, ZHAO Yun-cheng2, KUANG Ling1,WANG Li-qin2,YE Xiao-fang, HOU Min, HUANG Jun-cheng2* (1,Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China；2.Key Laboratory of Animal Veterinary Biotehnology of MOA, Xinjiang Academy of Animal Science, Urumqi 830000,China) Abstract：This study investigated the effects of three cytokines（LIF、EGF、bFGF）, two drugs(SU5402, heparin sodium), Partial pressure of oxygen（5%O2, 20%O2）and temperature（37℃、39℃）on culture of primary Kunming mouse embryonic stem cell (KM-ESC). The blastocysts of KM-mouse were cultured in the medium of KM-ESC. The formation rate of primary embryonic stem cell colony was observed and diameter was measured after 4 d. The results showed that the three cytokines and heparin sodium promoted proliferation of ESC. The effective subsequence was LIF heparin sodium EGFbFGF. but the effect of SU5402 was not significant；39℃ is beneficial to the generation and proliferation of primary and of KM-ESC, respectively; the effect of Partial pressure of oxygen was not significant. Keyword：KM-mouse；ESC; Cytokine；Temperature；Partial pressure of oxygen 昆明系小鼠是我国使用最广泛的小鼠品种，对我国的自然科学实验研究有巨大的作用，但是昆明系小鼠胚胎干细胞（KM-ESC）的研究落后于国外一些小鼠胚胎干细胞（mESC）的研究。目前国际上通用的mESC主要来自于129品系的小鼠，129品系小鼠与昆明系小鼠相比，饲养条件要求较高，繁殖能力低下，如果能够在我国使昆明系小鼠胚胎干细胞建系成为我国的自主知识产权的mESC系，将有助于推动我国胚胎干细胞(ESC)的科研工作。虽然国外目前对与mESC研究较多，培养体系已经基本完善，但是这些研究结果并不一定适用于国内KM-ESC的培养，因为品系是影响ESC的一个重要因素，KM-ESC建系任然面临着巨大的困难[1-4]因此，研究KM-ESC的培养条件十分必要。本实验采用N2B27的培养体系，该体系中的成份相对明确有利于研究各种因素对