DB33T6253-2007无公害豆芽第3部分6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定.doc

DB33/T ××××.3—2006 PAGE 2 PAGE 1 浙江省质量技术监督局 发布 2007-03-05实施 2007-02-05发布 无公害豆芽第3部分：6－苄基腺嘌呤残留量和4－氯苯氧乙酸钠残留量的测定 DB33/T 625.3—2007 DB33 浙江省地方标准 ICS67.050 C53 备案号： DB33/T 625.3—2007 PAGE I 前 言 DB33/ 625－2007《无公害豆芽》分为三个部分： ——第1部分：生产技术规程； ——第2部分：质量安全要求； ——第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定。 本部分为DB33/ 625－2007《无公害豆芽》第3部分。 本部分的附录A和附录B为资料性附录。 本部分起草单位：浙江省疾病预防控制中心、宁波市疾病预防控制中心、杭州市质量技术监督检测院、浙江省农业厅农作物管理局、宁波市卫生监督所、宁波市五龙潭蔬菜食品有限公司、宁波市质量技术监督局。 本部分主要起草人：李小平、韩见龙、蔡增轩、金米聪、赵建阳、芮昶、蒋经伟、陶礼明、戴建刚。 PAGE 7 无公害豆芽第3部分：6－苄基腺嘌呤残留量和4－氯苯氧乙酸钠残留量的测定 第一法 豆芽中6-苄基腺嘌呤残留量的测定——LC-MS/MS法 范围 本方法规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法。 本方法适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定。 本方法检出限为1×10-6 mg/kg。 原理 豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取，反相柱分离，电喷雾离子化（ESI）和多离子反应监测（MRM）方式进行定量测定。以试样峰的保留时间、母离子（m/z: 226.20[M+H]+）与子离子(226.2091.0, 226.20147.90)定性，以子离子(226.2091.0)峰面积外标法定量。 试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水。 乙酸。 乙腈（HPLC）。 甲醇（HPLC）。 50%的甲醇水溶液。 酸化甲醇：每100 mL甲醇中加入乙酸50μL，混匀。 标准溶液的配置： 标准储备溶液 精密称取6-苄基腺嘌呤（含量＞98.0％）0.1000g于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为标准储备溶液。此标准储备溶液每毫升相当于1.0 mg 6-苄基腺嘌呤。标准使用液用甲醇稀释至每毫升含1μg的6-苄基腺嘌呤。在4℃冰箱中储存，有效期1个月。 标准工作溶液 空白豆芽萃取液制备 选择在生产过程中未添加6-苄基腺嘌呤的豆芽菜。按5.1 试样处理方法提取，经0.22μm有机 滤膜过滤。必要时使用LC-MS/MS分析，以确定在6-苄基腺嘌呤出峰处不存在干扰。 标准工作溶液系列配制 准确吸取标注使用液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL于进样瓶中，加空白豆芽萃取液（3.6.2.1）至1 mL。配制成浓度依次为1 ng/mL、2ng/mL、4 ng/mL、6 ng/mL、8 ng/mL、10 ng/mL的标准溶液系列，供LC-MS/MS分析。 仪器 组织捣碎机。 天平（精度0.01和0.0001g）。 高效液相色谱-电喷雾-串联四极杆质谱（LC-ESI-MS/MS）。 均质机（速度范围： 6,000－24,000 rpm）。 离心机(最高转速:15,000 RPM)。 分析步骤 试样处理 称取豆芽样品500g用食物粉碎机粉碎后，取5g样品（精确至0.01g）于50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL酸化甲醇，用均质机匀质3 min,10000 rpm离心10min，上清液转入50 mL容量瓶中，样品再用10 mL酸化甲醇重复提取一次。合并上清液，用水定容至刻度，摇匀，吸取2mL于10容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，经0.2μm 滤膜过滤，供LC-MS/MS分析。 色谱参考条件 色谱柱：Waters SunFire C18柱（2.1mm×150mm， 5μm 颗径）。 流动相A：水（0.1%甲酸）。 流动相B：甲醇（0.1%甲酸）。 流速：0.30 mL/min。 进样量： 10 uL。 柱温：35℃。 表1 梯度洗脱条件 时间（min）流动相A流动相B变化曲线0.0050%50%3.0044%56%63.250%0%64.250%0%14.5050%50%68.0050%50%1注：变化曲线：1为立即变化，6为线性变化质谱参考条件 离子化方式 ESI+。 毛细管电压 (kV) 3.00。 锥孔电压 (V) 57。 RF Lens 1 35.0。 Aperture (V) 0.0。 RF Lens 2 0.3。 源温度 (℃) 120。 脱溶