分子生物学5课件.pptx
三、原核生物的基因轉錄及表達調控1.轉錄機器(裝置)(transcriptionapparatus)(1)RNA聚合酶(RNApolymerase)?(40kD)?(150kD),?‘(160kD)?(70kD):specificityfactor核心酶(coreenzyme):?,?‘,2?全酶(holoenzyme):?,?‘,2?,??:specificityfactor
RNApolymerase(holoenzyme)
三、原核生物的基因轉錄及表達調控1.轉錄機器(裝置)(transcriptionapparatus)(2)啟動子(promoter)聚合酶的結合位點(bindingsite),一般位於轉錄起始位點上游RNA聚合酶與啟動子的結合(RNApolymerase/promoterbinding)ClosedpromotercomplexOpenpromotercomplex,轉錄才能開始
RNApolymerase/promoterbinding
(2)啟動子(promoter)Promoterstructure共同序列(consensussequence)Pribnowbox(-10box,DavidPribnow發現)-35box(-10box與-35box的最佳距離為17?1bp)下調突變(downmutation)上調突變(upmutation)
Promoterstructure下調突變(downmutation)上調突變(upmutation)
(2)啟動子(promoter)Promoterstructure強啟動子還有一些額外的元件,如E.coli編碼rRNA的rrngene中的UPelement(上游元件),可提高表達數十倍
Promoterstructure
(3)轉錄起始(transcriptioninitiation)Foursteps:FormationofaclosedpromotercomplexConversionoftheclosedpromotercomplextoanopenpromotercomplexPolymerizingthefirstfewnucleotides(upto10)whilethepolymeraseremainatthepromoterPromoterclearance
Stagesoftranscriptioninitiation
The?cycle
(4)延伸(elongation)核心酶起極其重要的作用,?亞基參與轉錄出的RNA的磷酸二酯鍵的形成
Elongation
(4)延伸(elongation)轉錄的拓撲學:兩種假說RNApolymerase及新合成的RNA都圍繞DNA旋轉RNApolymerase前後的DNA反向旋轉第二種假說有較多的依據:拓撲異構酶(topoisomerase)的存在
Elongation
(5)轉錄終止
(terminationoftranscription)聚合酶到達終止子(terminator)就會從範本上脫落終止子有兩種(終止方式也有兩種)intrinsic(?-independent)terminator(termination)?-dependentterminator(termination)
(5)轉錄終止?-independenttermination較為簡單,一段反向重複序列(invertedrepeat)與一富含T的區域(T-richregioninthenontemplatestrand)即為終止信號
?-independenttermination
(5)轉錄終止?-dependenttermination終止子只有一段反向重複序列(能形成hairpin結構)?是一種蛋白質(6聚體),可使RNA聚合酶的轉錄能力大大下降(具RNA-DNA解螺旋酶的作用,能解開轉錄複合體中RNA-DNA雙鏈)
?-dependenttermination
Atypicaltranscriptionunitsensestrand=nontemplatestrandantisensestrand=templatestrand(有義鏈)(反義鏈)