【细胞生物学技术B】15（2）免疫荧光.pdf
文本预览下载声明
细胞免疫荧光技术
细胞化学
在原位观察到化学成分,提供什么信息？
1.推测化学成分（大分子）的可能功能
2.观察生理、病理状态下的大分子动态变化
定位的变化量的巨大变化
3.指示大分子所在的特异细胞，观察细胞在组织
的分布及在生理病理状态下的变化
特点1.原位：怎样做到组织/细胞的原位？
固定（Fixation)
1.保持细胞、组织的固有形态和结构；
2.防
显示全部
文档详情
相似文档
-
【细胞生物学技术】15（2）免疫荧光.pdf
细胞免疫荧光技术
细胞化学
在原位观察到化学成分,提供什么信息？
1.推测化学成分（大分子）的可能功能
2.观察生理、病理状态下的大分子动态变化
定位的变化量的巨大变化
3.指示大分子所在的特异细胞，观察细胞在组织
的分布及在生理病理状态下的变化
特点1.原位：怎样做到组织/细胞的原位？
固定（Fixation)
1.保持细胞、组织的固有形态和结构；
2.防
-
【细胞生物学技术 上海交大】 免疫荧光.pdf
细胞免疫荧光技术
细胞化学
在原位观察到化学成分,提供什么信息？
1.推测化学成分（大分子）的可能功能
2.观察生理、病理状态下的大分子动态变化
定位的变化量的巨大变化
3.指示大分子所在的特异细胞，观察细胞在组织
的分布及在生理病理状态下的变化
特点1.原位：怎样做到组织/细胞的原位？
固定（Fixation)
1.保持细胞、组织的固有形态和结构；
2.防
-
细胞免疫荧光技术.ppt
关于细胞免疫荧光技术实验目的掌握免疫荧光技术的基本原理熟悉细胞免疫荧光技术的方法了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果第2页,共17页，2024年2月25日，星期天实验原理原位检测抗原抗体特异反应间接法间接荧光抗体染色法示意图抗原抗体荧光素标记的抗抗体激发光显示荧光Hela细胞Vinculin第3页,共17页，2024年2月25日，星期天实验用品试剂：固定液：4%PFA细胞通透：0.2%TritonX封闭试剂：10%正常山羊血清一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体二抗:AlexaFluor555标记的山羊抗小鼠IgGDAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚）PBS洗涤缓冲液：PH7.
-
细胞免疫荧光技术.ppt
关于细胞免疫荧光技术实验目的掌握免疫荧光技术的基本原理熟悉细胞免疫荧光技术的方法了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果第2页,共17页，星期六，2024年，5月实验原理原位检测抗原抗体特异反应间接法间接荧光抗体染色法示意图抗原抗体荧光素标记的抗抗体激发光显示荧光Hela细胞Vinculin第3页,共17页，星期六，2024年，5月实验用品试剂：固定液：4%PFA细胞通透：0.2%TritonX封闭试剂：10%正常山羊血清一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体二抗:AlexaFluor555标记的山羊抗小鼠IgGDAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚）PBS洗涤缓冲液：PH7.4材料：
-
细胞免疫荧光.doc
DAPI
DAPI即4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在400nm左右。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green flu
-
免疫荧光细胞化学技术.pptx
第四章免疫荧光细胞化学技术;免疫荧光细胞化学技术
(immunofluorescencecytochemistry)
采用荧光素标识旳已知抗体或抗原作为探针，检测待测细胞或组织内旳靶抗原或抗体，形成带有荧光素旳抗原抗体复合物。利用荧光显微镜观察标本，根据组织细胞中荧光物质旳存在，拟定抗原或抗体旳性质并定位，以及利用定量技术测定含量。;荧光抗体法：
用荧光抗体示踪或检验相应抗原旳措施。
较常用
荧光抗原法：
用已知旳荧光抗原标识物示踪或检验相应抗体旳措施。
荧光抗体法+荧光抗原法=免疫荧光细胞（组织）技术;免疫荧光细胞化学措施：
直接法、间接法
免疫荧光染色标本制备：
涂片、印片、细胞单层培养物
-
免疫荧光细胞化学技术绪论.ppt
第四章 免疫荧光细胞化学技术;免疫荧光细胞化学技术
(immunofluorescence cytochemistry)
采用荧光素标记的已知抗体或抗原作为探针，检测待测细胞或组织内的靶抗原或抗体，形成带有荧光素的抗原抗体复合物。利用荧光显微镜观察标本，根据组织细胞中荧光物质的存在，确定抗原或抗体的性质并定位，以及利用定量技术测定含量。;荧光抗体法：
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法。
较常用
荧光抗原法：
用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法。
荧光抗体法+荧光抗原法=免疫荧光细胞（组织）技术;免疫荧光细胞化学方法：
直接法、间
-
免疫荧光细胞化学技术.ppt
七、非特异性染色的产生及消除方法
产生的原因：（1）部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）组织中还可能存在类属抗原与相应抗体结合。（4）制备的免疫血清中混杂抗其他组织成分的抗体。（5）抗体分子上标记的荧光素分子太多，过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。（6）荧光素不纯，标本固定不当等。
第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日关于免疫荧光细胞化学技术第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光细胞化学技术(immunofluoresce
-
免疫荧光细胞化学技术 (3).ppt
关于免疫荧光细胞化学技术(3)第1页，共30页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光细胞化学技术(immunofluorescencecytochemistry)采用荧光素标记的已知抗体或抗原作为探针，检测待测细胞或组织内的靶抗原或抗体，形成带有荧光素的抗原抗体复合物。利用荧光显微镜观察标本，根据组织细胞中荧光物质的存在，确定抗原或抗体的性质并定位，以及利用定量技术测定含量。第2页，共30页，星期日，2025年，2月5日荧光抗体法：用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法。较常用荧光抗原法：用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法。荧光抗体法+荧光抗原法=免疫荧光细胞（组织）技术免疫荧光细胞化
-
免疫荧光技术 1.ppt
细胞爬片免疫荧光实验流程 1. 细胞爬片的制作； 2. 固定（4%的多聚甲醛）； 3. 细胞膜通透（0.5%Triton X-100，20min）； 4. 封闭（6%山羊血清，30min）； 5. 一抗孵育（一抗浓度，湿盒，4℃过夜，PBS漂洗）； 6. 二抗孵育（二抗种属，湿盒，室温1h，避光，PBS漂洗）； 7. 复染核（DAPI，避光，5min，PBS漂洗）； 8. 封片（荧光淬灭剂的封片液）； 9. 荧光显微镜下观察采集图像。 1. 细胞的固定 【固定的定义】 将新鲜的活体组织或细胞，立即加入固定液中，以此使细胞保持原有形态、结构的一种方法。 【固定的意义】
-
免疫荧光技术.ppt
细胞爬片免疫荧光实验流程 1. 细胞爬片的制作； 2. 固定（4%的多聚甲醛）； 3. 细胞膜通透（0.5%Triton X-100，20min）； 4. 封闭（6%山羊血清，30min）； 5. 一抗孵育（一抗浓度，湿盒，4℃过夜，PBS漂洗）； 6. 二抗孵育（二抗种属，湿盒，室温1h，避光，PBS漂洗）； 7. 复染核（DAPI，避光，5min，PBS漂洗）； 8. 封片（荧光淬灭剂的封片液）； 9. 荧光显微镜下观察采集图像。 1. 细胞的固定 【固定的定义】 将新鲜的活体组织或细胞，立即加入固定液中，以此使细胞保持原有形态、结构的一种方法。 【固定的意义】
-
免疫荧光细胞化学.ppt
免疫荧光细胞化学冷雪飞抗体(或抗原)荧光抗体（或抗原）荧光素相应抗原（或抗体）复合物再发射约10-9s内发生称为荧光免疫荧光细胞化学技术用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。直接法、夹心法、间接法、补体法。直接法检查抗原法检查抗体法这是最早的方法，用已知特异性抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。此法很特异和简便，但一种荧光抗体只能检查一种抗原，且敏感性较差?双重免疫荧光标记法在同一细胞组织标本上需要同时检查两种抗原时，要进行双重荧光染色，一般均采用直接法，将
-
细胞免疫荧光步骤.pdf
方法一：
1. 首先需要把细胞养在玻璃片上〔悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片〕
2. 然后在 4 ％PFA里面室温下固定 30 分钟， PBS洗两次， 0.1% TX-100 室温下作用 1－2 分钟
使细胞膜通透。
3. 接下来进展荧光标记， 需要在一个大的容器 〔面积大，扁平状的， 比方大的培养皿〕 里面，
放一用水打湿的滤纸，以保持湿度。
4. 剪一片适宜大小的 parafilm ，在上面滴上稀释在 1％ BSA/TBS中的一抗〔稀释倍数依
-
探索免疫荧光技术：开启微观生物世界的荧光之门.pdf
生命科学一站式供应商
探索免疫荧光技术：开启微观生物世界的荧光之
门
一、反应原理
免疫荧光技术以抗原抗体特异性反应原理为基石构建而成。首先，把荧光素巧妙地与已知的抗原或者抗体相连接，使其成为带有荧
光标记的特殊探针。随后，运用该荧光抗体（亦或是荧光抗原）对血清、体液、细胞以及组织中的对应抗原（或者抗体）展开精准探测。
当在组织或细胞内部，抗原与抗体成功结合形成复合物时，此复合物便携带上了标记的荧光素。一旦受到外界激发光的照射，荧光素便
会释放出荧光。凭借对荧光强度的精准测定以及对表达位置的精确观察等多方面指标的综合考量，进而实现对目标抗原或抗体的定性鉴
别与定量测定。
二、检测方法
01直标
-
免疫荧光染色技术在悬浮细胞中的应用.pdf
免疫荧光染色技术在悬浮细胞中的应用
标题：免疫荧光染色技术在悬浮细胞中的应用：从基本原理到前沿研
究
引言：
免疫荧光染色技术是一种重要的生物学实验方法，它通过利用抗体的
高度特异性与目标分子结合，再用荧光染料标记抗体，从而实现对特
定细胞或分子的定位和检测。这项技术广泛应用于悬浮细胞的研究领
域，为科研人员提供了一种非常有力的工具，帮助他们深入探究细胞
的结构、功能和信号传导等方面。本文将从免疫荧光染色技术的基本
原理开始，逐步介绍其在悬浮细胞中的应用，并探讨相关的前沿研究
成果。
第一部分：免疫荧光染色技术的基本原理
1.1抗体的选择和制备
在免疫荧光染色技术中，选择具有较高特异性和亲和力