《DNA重组技术的基本工具》课件.ppt

基因工程;设想一;每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。;基因工程的产物;什么叫基因工程？;;问题探讨：;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;基因工程培育抗虫棉的关键步骤：;解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？;一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;⒉种类与命名：;T;;;限制酶的识别序列：;限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中轴线〔如图〕，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称、重复排列的。;当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。;;;什么叫黏性末端？;SmaⅠ;二、DNA连接酶——“分子缝合针”;二、DNA连接酶——“分子缝合针”;可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，;;3.类型：;三、“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体;三、“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体;3、载体需要的条件：

⑴有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。

⑵对受体细胞无害

⑶能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存

⑷有某些标记基因，便于筛选;1〕质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。;5〕真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的根底上进行人工改造的。;能复制并带着插入的目的基因一起复制;;分组讨论下列问题;寻根问底;2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？;3、要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;5、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？;;7、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？;1〕载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。

2〕载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。

3〕载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组DNA的筛选。

4〕载体DNA必需是平安的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细???中去。

5〕载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。

实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。;关于内含子和外显子的说法正确的选项是〔〕

A.内含子和外显子在转录的过程中都能够转录成成熟的mRNA

B.只有外显子能够转录成mRNA，tRNA，rRNA

C.原核细胞基因中也有内含子和外显子

D.由于内含子不能编码蛋白质，故它属于非编码区;;