RNA干扰抑制猪肉内源性逆转录病毒表达及其多克隆抗体制备的研究的中期报告.docx

RNA干扰抑制猪肉内源性逆转录病毒表达及其多克隆抗体制备的研究的中期报告 本次研究旨在研究RNA干扰抑制猪肉内源性逆转录病毒(PIV)表达的效果，并制备PIV的多克隆抗体。已完成的中期研究工作如下： 1.构建RNA干扰质粒 在前期研究的基础上，本次实验设计了三种不同的RNA干扰质粒，分别用于非结构蛋白和两种结构蛋白的靶向抑制。质粒的构建包括PCR扩增目标基因片段、克隆到RNAi载体中并进行序列鉴定等步骤。最终成功构建了三种RNA干扰质粒，并进行了质粒提取和鉴定。 2.转染细胞并检测PIV表达 将构建好的RNA干扰质粒分别转染到猪肾细胞PK-15中，用Green Fluorescent Protein等染色方法检测了PIV的表达情况。结果显示，与对照组相比，目标基因的表达受到了明显的RNA干扰抑制。 3.多克隆抗体制备 采用重组PIV外膜蛋白的方法制备PIV的多克隆抗体。首先通过PCR扩增PIV外膜蛋白的基因片段，克隆到表达载体中并进行高效表达。随后进行细胞抗原的选择、酶联免疫吸附实验的筛选和小鼠免疫等步骤，最终成功制备出了具有良好特异性和灵敏度的PIV多克隆抗体。 综上所述，本次研究成功构建了RNA干扰抑制猪肉内源性逆转录病毒表达的质粒，实验结果表明RNA干扰法可有效抑制PIV的表达。同时成功制备出了具有高特异性和灵敏度的PIV多克隆抗体，为后续PIV相关样品检测和研究提供了重要的工具。