医学分子生物学融合创新实验教学大纲-山东大学医学基础实验教学中心.doc

《医学分子生物学实验》 课程教学大纲 山东大学医学院《医学分子生物学实验》课程实验教学大纲 课 程 名 称： 医学分子生物学实验 英 文 名 称： Practice of Medical Molecular Biology 课 程 编 号： 实 验 课 性 质： 融合创新性实验 课 程 负 责 人： 胡晓燕 开放实验项目数： 大 纲 主 撰 人： 辛华，刘奇迹，任桂杰，徐霞，张鹏举 苑辉卿 大 纲 审 核 人： 苑辉卿 一、学时、学分 课程总学时： 40 实验学时：40 课程总学分： 实验学分： 二、适用专业及年级 基础、临床、预防、口腔医学、护理学、药学专业的五、六、七年制 三、实验教学目的与基本要求 通过医学分子生物学融合性实验教学，将细胞生物学、生物化学与分子生物学、医学遗传学学科的基础理论知识、实验技能操作、学科的前沿进展以及疾病的分子机理及治疗原则等知识进行归纳、融合，形成系统化的知识结构。通过实验教学，使学生熟悉实验室的常用仪器，培养学生动手能力、发现问题，并从单独学科知识体系对问题进行综合分析，从而解决问题。通过资料查阅、总结，学生自己找出问题，并设计实验进行验证及探索，培养学生的科研能力、创新意识及团队精神。 四、主要仪器设备 低温高速离心机紫外可见分光光度计恒温水浴箱→5％脱脂奶粉封闭1h→加入一抗反应1h→PBS洗涤3次，每次10min→加入HRP标记的二抗反应1h→PBS洗涤3次，每次10min→加入显色底物DAB后目的蛋白即显示出棕黄色。通过条带颜色的深浅和有无比较正常人和患者血清中免疫免疫球蛋白的表达差异 8 分小组进行 徐霞 七年制中已开，五六年制中未开展。 2 PCR技术原理及应用 1)．用Trizol试剂RNA 500ng、Random hexaprimer,AMV reverse transcriptase Buffer、AMV reverse transcriptase、RNase inhibitor、dNTP 3)．PCR扩增目的基因：扩增小鼠表皮生长因子。引物为特异性引物，扩增长度bp；内对照为β-actin，其扩增长度218bp。PCR扩增 4)．PCR反应结果的检测，琼脂糖凝胶电泳分泌型绿色荧光蛋白表达载体的构建及表达检测构建分泌型绿色荧光蛋白表达载体 信号肽的DNA序列绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1分泌型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-S-P。 2)．培养细胞的制备： 胰酶消化贴壁生长的PC-3细胞，按照2×105/孔接种于24孔板，置细胞培养箱中培养。 3).细胞转染：应用脂质体进行细胞转染. 4) 表达检测：转染后48h，倒置荧光显微镜