基因工程及其应用课件1.ppt

* * 红色荧光蛋白 红色荧光蛋白基因 基因表达 基因工程：即 。 通俗的说，就是按照 ，把一种生物的某种 提取出来，加以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的 。 原 理： 操作水平： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 基因拼接技术或DNA重组技术 定向 遗传性状 一、基因工程概念 “剪刀” “运载体” “针线” DNA 人们的意愿 基因 修饰改造 能识别特定的核苷酸序列，并能在特定位点上切割DNA 二、基因工程的操作工具 指“ 限制性核酸内切酶 ”(限制酶) 主要存在于微生物 专一性 已发现4000多种 种类: 来源: 特点: 作用于： 磷酸二酯键 1、基因的“剪刀” BamHI GGATCC CCTAGG EcoRI GAATTC CTTAAG AAGCTT TTCGAA HindIII NotI SacI GAGCTC CTCGAG SalI GTCGAC CAGCTG XbaI TCTAGA AGATCT ApaI GGGCCC CCCGGG SmaI AluI AGCT TCGA CCCGGG GGGCCC ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ 限制酶名称 限制酶名称 识别序列 识别序列 GCGGCCGC CGCCGGCG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 练习使用EcoRI 剪切目的基因 CTTCATG AATTC CCTAA GAAGTACTTAA G GGATT G GCAT CTTAA AATTC CGTA G 目的基因 黏性末端 磷酸二酯键 被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: 形成的黏性末端不同 不同的限制酶呢？ 具有 2、基因的“针线” 指“DNA连接酶” 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子 作用： 形成： 磷酸二酯键 磷酸二酯键 使用DNA连接酶制作重组DNA分子 甲片段 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 乙片段 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重组DNA分子 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 3、基因的“运载体” （2）种类： 质粒、噬菌体和动、植物病毒等 （1）作用： 将 送入受体细胞 外源基因 存在于许多______ 以及__________ 等生物中，是拟核或细胞核外能够 的 _____________。 质粒： 细 菌 自主复制 环状DNA分子 酵母菌 （3）条件： 1、具有一个或多个限制酶切位点，便于与外源基因连接 2、在细胞内能自主复制且稳定保存 3、具有标记基因便于筛选 重组质粒 DNA连接酶 …… CTTAA G CTTAA G CTTAA G CTTAA G 目的基因 相同的限制酶 三、基因工程的操作步骤 提取目的基因 1 直接分离基因 人工合成基因 方法 目的基因与运载体结合 2 实际上是不同来源的基因重组的过程。 将目的基因导入受体细胞 3 受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞 原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 目的基因的检测与鉴定 4 1.下列关于基因工程的叙述中,正确的是: A.限制酶只用于提取目的基因B.细菌体内的环状DNA均可作运载体C.DNA连接酶可用于目的基因和运载体的连接D.重组DNA分子一旦进入受体细胞,基因工程则完成. 2.以下说法正确的是: A.目的基因是指重组DNA B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C.DNA重组所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体D.只要受体细胞中含有目的基