病毒及细胞相互作用.ppt

人或动物细胞在一定条件下可在实验室的培养瓶内生长。 优点： 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化 原代细胞（primary cell） 动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。 二倍体细胞株（diploid cell strain） 将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。 传代细胞系（established cell line）能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。 第二节 病毒与细胞的相互作用 杀细胞感染 非杀细胞感染 引致持续感染，对细胞代谢无影响。 产生干扰素 一、病毒引致的杀细胞变化 细胞病变效应(cytopathic effect,CPE) 由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。 Formation of multinucleated cells. 包涵体的性质 病毒成分的蓄积，如狂犬病毒的Negri氏体 大量晶格样排列的病毒颗粒组成，如腺病毒的包涵体 细胞变性的产物，不含病毒，如疱疹病毒的包涵体 复习思考题 干扰素抗病毒机制 RNA干扰（RNA interference, RNAi）指细胞利用内源或外源的小分子双股RNA片段，特异性地降解同源基因的mRNA，从而导致靶基因转录后的基因沉默（post translational gene silence, PTGS）的现象。 * * 第四章 病毒与细胞间的相互作用 第一节 病毒的培养 第二节 病毒与细胞的相互作用 第一节 病毒的培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 动物接种： 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 鸡胚接种： 一种比较经济简便的方法。 一般采用孵化9-12天的鸡胚，按病毒种类不同接种于鸡胚的不同部位。 可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。 细胞培养 （一）细胞的类型 （二）细胞培养的方法 静置培养（stationary culture） 实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。 旋转培养（roller culture） 大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞帖附于玻瓶四周，长成单层。 悬浮培养（suspensive culture） 通过搅拌使细胞处于悬浮状态，并补充营养和校正pH，使之生长或维持存活。 微载体培养（micro-carrier culture） 是在悬浮培养的基础上，结合微载体的细胞培养技术。 微载体是直径100~35μm的微小颗粒，对细胞无毒性，细胞可贴附其上长成单层。 生产性感染（productive），病毒感染后能产生和释放子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化 非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染（abortive infection） 病毒感染后不形成完整的病毒颗粒 持续性感染（persistent infection）是指持续长时间的感染，感染过程中不形成感染性的病毒颗粒 病毒与细胞的相互作用 多瘤病毒、腺病毒 鼠、禽白血病病毒 否，致肿瘤DNA病毒 是，致肿瘤反录病毒 细胞形态改变，细胞可无限制传代 移植至实验动物可产生肿瘤 转化 脑组织的犬瘟热病毒 否，但可通过共培养等诱导 通常无影响 持续性、非生产性 瘟病毒、砂粒病毒、狂犬病毒、大多数反录病毒 是 无CPE，细胞代谢无甚妨碍，细胞继续分裂， 某些分化的细胞可失去某些功能 持续性、生产性 甲型疱疹病毒、肠病毒、呼肠孤病毒 是 细胞病变（CPE），细胞蛋白质、RNA、DNA合成被抑制。细胞死亡 杀细胞 例证 是否产生传染性病毒颗粒 对细胞的影响 感染的类型 细胞肿大 细胞圆缩 形成合胞体 病毒所致的细胞病变 tissue culture cells epithelial epithelioid fibroblastic epithelial cells uninfecte