食管癌癌组织微卫星DNA序列不稳定性的分析.pdf

中文摘要 食管癌癌组织微卫星DNA序列不稳定性的研究 摘 要 目的：食管癌是危害人类生命健康的主要疾病之一， 是我国常见的恶性肿瘤。其发病以华北地区为高，据 1980年统计，其死亡率为9．7／10万，占恶性肿瘤死亡率 的第四位(∞。多年来，世界各国医务工作者对食管癌的 诊治进行了不懈地研究和探索，但因其早期临床症状不 明显，待就诊时，常已发展至中、晚期，造成手术及放 疗、化疗后效果不理想。 随着分子生物学技术的发展和完善，对肿瘤的研究 已进入基因水平。学者发现，在参与肿瘤发生、发展的 有关基因中，除癌基因和抑癌基因外，还存在另一种癌 Gene， 相关基因，即错配修复基因(MismatchRepair MMR)。MMR突变子表型最常见的是微卫星DNA序列 Instability,MSI)。微卫星和MSI 不稳定性(Mierosatellite 是近年有关肿瘤研究中的一个热点，它是继癌基因和抑 癌基因之后，肿瘤发病分子机制的又一重大进展。微卫 星DNA是指一类不编码的、数量可变的、广泛存在于 原核和真核基因组中的核苷酸重复序列，以二核苷酸重 复序列为常见。它多位于基因的非编码区以及染色体的 近端粒区，遵循孟德尔遗传规律。MSI是指由于DNA errors)引起的简单重复序列的改 复制错误(Replication 变，表现为肿瘤组织与其相应的非肿瘤组织DNA结构 性等位基因的大小发生改变。MSI最早在1993年发现 中文摘要 子遗传性非息肉性结肠癌(HereditaryNonpolyposis Colorectal Cancer,HNPCC)，矮又陆续在胃癌、胰腺癌、 子宫内膜癌、卵巢癌、小细胞肺癌等肿瘤中发现。迄今 为止，几乎每一类型的瓣瘤都已被证明有MSI的存在。 产生MSI的主要原因题MMR功能缺陷，不能正常发挥 错既修复作焉，孳|超复制差镄，导致基因缉不稳定，进 而引起癌变。有关MSI在食管癌中的表现，因国内外的 萋秀究剐嚣l开始，结采不尽一致。 本实验试图对食管癌和MSI的相关性做进一步研 究，力求找妥一种筛查食管癌赢发区易感个傣耨静分子 方法，对高风险个体进行早期诊断，以利于设计有针对 性昭治疗方案。 材料与方法。所采用标本均为2001年8月至2003 年1月在河j￡医科大学第西医院胸外科行食管癌手术切 除的病例。本组共30例食管癌患者，男17例，女13 例。年龄42～72岁，平均年龄57．2岁。病堙类型：鳞 状细胞癌23例，腺癌2例，小细胞癌5例：其中高分化～ 中分化癌20侧，低分化癌5例，未分化癌5例；PTNM 分期：I期l例，II期16例，IIl期13例；病理谣实有 区域淋巴结转移者14例，未证实有区域淋巴结转移者 l6例。黢有病人均无肿瘤家族史，亦未接受过放疗及化 疗。所有病例均记录居住地、生活习惯等一般情况。 每一瘸铡割取翳瘪中心部位的瘿组织及团一标本远 离癌组织5cm阻上的食管正常粘膜，用蛋白酶K消化、 酚缀仿异戊醇提淑正髫缝缓露癌组织基因鳃DNA。选取 中文摘要 的D18S58两个微卫星位点，按下列条件进行PCR扩增： 退火：59℃，30s；延伸：72℃，30s。40个循环；(3)72 ℃延伸5 94℃，45s；退火：59℃，30s；延伸：72℃，45s。35 个循环；(3)72。C延伸10min。PCR产物经7％变性聚丙 烯酰胺凝胶电泳后，EB染色，在凝胶呈像系统上观察 摄影。 将肿瘤组织与相应的正常组织比较，若肿瘤的某一 等位基因出现条带的增多或位置的改变，则评价为微卫 星不稳定(MSI)；若等位基因为纯合子，记为无信息(uI)。 结果：1．不同位点MSI差异较显著(见Table2)。30 例食管癌组织中，D3S1067和D18S58两个位点均正常 的有18例，8例在D3S1067位点出现MSl，为26．7％， 频率较高；6例在D18S58位点出现MSI，为20％；2 例在两个位点同时有MSI的表达(见Table2)。2．食管癌 中3号染色体，尤其是3p14