2.2.1+动物细胞培养+课件【知识精讲精研】高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

动物细胞培养细胞工程

01动物细胞培养的条件动物细胞培养：从动物体中取出相关的组织或器官，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。动物细胞培养需要什么样的条件？回忆：机体给体内细胞提供了哪些适宜的条件使其能够维持正常的生命活动？原理？细胞增殖(有丝分裂)

血浆淋巴组织液营养激素，生长因子等神经系统内分泌系统免疫系统抗体特殊物质O2，CO2无毒无菌pH渗透压温度01动物细胞培养的条件

01动物细胞培养的条件无菌、无毒的环境无菌：无菌操作—防止培养过程中的微生物污染无毒：定期更换培养液温度、pH和渗透压气体环境温度：36.5±0.5℃pH：7.2-7.4渗透压：O2：细胞代谢所必须CO2：维持培养液的pH值用培养皿或松盖培养瓶，在95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。维持细胞正常形态—清除代谢产物，防止代谢产物积累对细胞造成危害。

01动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养条件将细胞所需的上述营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。通常需加入血清等一些天然成分。抗生素酚红基础营养胎牛血清液体培养基

01拓展血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中,蛋白质主要为白蛋白和球蛋白;氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本原料，且有些氨基酸是动物细胞本身不能合成的，必须由培养液提供;激素有胰岛素、生长激素等。血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，它们能促进细胞的生长、增殖和贴附。灭菌？

建构动物细胞培养的流程？02动物细胞培养的过程动物组织的选择：幼龄动物？老龄动物？幼龄个体的细胞分化程度低、分裂能力强，易培养新鲜取材的动物组织块分散成单个细胞细胞悬液原代培养传代培养

02动物细胞培养的过程机械方法胰蛋白酶处理胶原蛋白酶处理思考1.常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？说明细胞间的物质主要是蛋白质胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。动物组织块分散成单个细胞

02动物细胞培养的过程机械方法胰蛋白酶处理胶原蛋白酶处理思考2.用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理组织块，使组织分散成单个细胞的目的是什么？①使细胞与培养液充分接触，一方面保证细胞所需氧气和营养的供应，另一方面，另一方面保证细胞内代谢产物的及时排出。②使得在细胞水平操作的其他得以实现。动物组织块分散成单个细胞思考3.实验过程中，胰蛋白酶处理时间过长，会出现什么结果？细胞膜的成分中含有蛋白质，而胰蛋白酶能够水解蛋白质，因此，胰蛋白酶会把细胞消化掉。因此，胰蛋白酶处理的时间不能太长。加培养液细胞悬液放入培养瓶在适宜条件

02动物细胞培养的过程思考4.观察发现，细胞进入培养瓶后并不立即生长，细胞发生了什么行为？黏附贴壁铺展贴壁生长（大多数）悬浮生长（如淋巴细胞）悬液中大多数分散的细胞很快就贴附在瓶壁上生长增殖，这种现象称为细胞贴壁。细胞能够悬浮在培养液中生长增殖

02动物细胞培养的过程细胞接触抑制当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，糖蛋白识别了这种信息，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。肿瘤细胞失去接触抑制，在培养液可以无限增殖下去。思考5.动物细胞培养中贴壁细胞能否在培养瓶中不停增殖？悬浮细胞呢？

02动物细胞培养的过程细胞悬液放入培养瓶在适宜条件在适宜条件分瓶培养原代培养传代培养思考6.为什么要进行分瓶培养？悬浮生长贴壁生长细胞密度过大有害代谢物积累营养物质缺乏接触抑制分瓶培养(传代培养)解决原因原代培养问题细胞分裂受阻

02动物细胞培养的过程细胞悬液放入培养瓶在适宜条件在适宜条件分瓶培养原代培养传代培养思考7.进行分瓶培养时，如何处理？悬浮细胞贴壁细胞离心法收集胰蛋白酶处理制成细胞悬液分瓶培养

02动物细胞培养的过程机械方法胰蛋白酶处理胶原蛋白酶处理动物组织块分散成单个细胞加培养液细胞悬液放入培养瓶在适宜条件在适宜条件分瓶培养原代培养传代培养原代培养将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经过处理后的初次培养称为原代培养。将分瓶后的细胞培养称为传代培养。传代培养

分瓶传代10代细胞50代细胞无限增殖保持细胞正常二倍体核型少数：细胞核型改变，常出现异常染色体，失去接触抑制、形状不规则，获得不死性（永生性）（遗传物质没改变）思考8.能无限传代么？原代培养使用或保存的细胞通常为10代以内有限细胞系无限细胞系初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称为细胞系大部分：衰老死亡。

02动物细胞培养的过程有关动物细胞培养的问题讨论1.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞与