醋酸纤维电泳.ppt

了解电泳的概念和一般原理； 掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术； 判别动物血清中各种蛋白组分 二、实验原理 电泳 Electrophoresis 带电颗粒在电场的作用下向着与其所带电荷相反的方向迁移的现象。 不同溶质由于所带电荷性质，数量以及分子大小、形状不同，在电场中的泳动方向和速度不同而被分离. 式中r是球状分子的半径，η是缓冲液粘度，υ是电泳速度(υ= d / t，单位时间粒子运动的距离，cm / s )。 电泳分类 以醋酸纤维薄膜作为支持介质 准备 电泳 染色 漂洗 透明 取膜 * * 实验四 电泳技术概论  血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 动物医学院动物生化教研室 一、实验目的 同向电泳与电泳速度（mobility）有关，一般称迁移率。 电泳迁移率（m）是指在单位电场强度（1V/cm）时带电分子的迁移速度： 所以：  由上式可以看出，迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的粘度成反比。 电泳迁移率（Mobility，m） ⑴ 纸电泳（Paper electrophorisis） ⑵ 醋酸纤维薄膜电泳（Cellulose Acetate electrophoresis） ⑶ 琼脂凝胶电泳（Agar Gel electrophoresis） ⑷ 聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel electrophoresis PAGE ） ⑸ SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）。 按支持介质的不同可分为： 按支持介质形状不同可它为 ⑴ 薄层电泳 ； ⑵ 板电泳（水平和垂直） ； ⑶圆盘柱状电泳 按用途不同可分为 ⑴ 分析电泳； ⑵ 制备电泳； ⑶ 定量免疫电泳； 按所用电压不同可分为 ⑴ 低压电泳：100V～500V，电泳时间较长 ⑵ 高压电泳：1000V～5000V，电泳时间短 影晌电泳分离的主要因素 1.待分离生物大分子的性质（各自的电荷和形状大小 ） 2. 缓冲液的性质 （缓冲液的pH值，缓冲液的离子强度 ） 3.电场强度 （V/cm）是每cm的电位降，也称电位梯度。与电泳速度正比。 4. 电渗 （液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象 ） 5. 支持介质的筛孔 电泳系统 电泳装置 醋酸纤维薄膜电泳 人血清蛋白质的等电点 清蛋白 pI=4.88 α1-球蛋白 pI=5.06 α2-球蛋白 pI=5.06 β-球蛋白 pI=5.12 γ-球蛋白 pI=6.85-7.50 醋酸纤维薄膜分离血清蛋白质的基本原理 Pr COO- COO- NH3+ NH3+ Pr COO- COO- NH2 NH3+ Pr COOH COO- NH3+ NH3+ +H+ - H+ pH=pI (0) pHpI (+) pHpI (-) 三、实验步骤 电泳50min 染色（5min) 准备（醋酸薄膜、电泳槽的准备） 点样（无光泽面[毛面]，距编号一端1.5cm处） 电泳（稳流，0.3mA/cm膜宽，10min后， 0.5mA/cm膜宽） 漂洗（漂洗液I,II,III各约10min) 透明（透明液甲 2 min, 透明液乙1min ) 冷风吹干 透明后，热风吹干 醋酸薄膜 电泳槽的准备 点样 光面朝上，点样端在负极，稳流电泳 冷风吹干 热风吹干 第1步 第2步 第3步 第4步 * *