人谷氨酸脱羧酶65 DNA疫苗预防非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的机制探讨.pdf

生堡匡堂盘查!Q坚生!!旦!旦筮坠鲞筮!!塑堕堂!丛盟』鱼!i塑：盟型!堂竺!：!Q鲤：y!!坠：堂：!! ·1791· 糖尿病研究与防治． 人谷氨酸脱羧酶65DNA疫苗预防非肥胖 糖尿病小鼠糖尿病的机制探讨 罗建华周智广 蒋铁建裴剑浩李霞何凌孙曙光 【摘要】 目的探讨人谷氨酸脱羧酶65(GAD65)DNA疫苗预防非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖 尿病的作用机制。方法 只)3组，由胫前肌分别注射PBs、质粒PcDNA3．1、人GAD65DNA疫苗50¨g，1周后重复1次。观察 30周龄的累积糖尿病发病率。(2)各组取12周龄未发病NOD鼠(n=10)胰腺HE染色观察胰岛炎； 并用末端脱氧核糖核酸缺口标记法(TuNEL)加sABc法检测胰岛B细胞凋亡；ELIsA法测定血清、脾 细胞培养上清干扰素^y(IFN一1)和白细胞介素4(IL-4)水平；RT．PcR半定量检测脾脏IL_4、IFN一1和 核因子NF—ATc、NF-ATpmRNA表达水平。结果 (1)30周龄时，PBS、PcDNA、GAD65组发病率分别 mRNA相对吸光度值及血清IL4水平分别为1．93±0．34、0．70±0．16、36 pg／m1±8pg／IIll，显著高于 PBS组(0．79±O．15、O．49±O．11、19p∥ml±4p∥IIll，P均0．05)和PcDNA组(1．19±0．56、0．51± 0．15、26．9 p∥IIll±10．7pg／IIll，P均0．05)；而NF—ATpmRNA表达水平(0．49±0．15)则低于PBs 组(0．63±0．17，P0．05)。结论人GAD65DNA疫苗通过上调NF—ATc、IL_4和下调NF-ATp，从而 使免疫平衡向7rh2偏移，致使NOD鼠胰岛炎减轻，胰岛B细胞凋亡减少而预防糖尿病发生。 【关键词】糖尿病；小鼠，近交NoD Mechanismsof acid 65DNAvaccine diabetesinnon-ob姻e human甜utaIIlic decarbo】叮lase preven廿ng diabeticlIlice ￡U0以on一矗啪，ZHOU劢扣g啪昭，皿4ⅣGne书。n，PE，以on—h∞，Ⅱ瓤o，册“增， ．sE，Ⅳ鼽H—gu。ng． cemmfH琥 慨t拓“耙旷朋et06Dz妇m口以西以oc矗聊z99y，co以艇。凡g”月砸P打oz， ‰西ers拓y，C地咿矗口4J00JJ，醌iM cor7邯po凡反昭。以^or：Z肋UZ^i一舭口增，西m甜：加ou孵@如￡，凇以com To themechanismsofhumanGAD65DNAvaccine 【Abs仃act】obje吐ive investigate preventing insulitisanddiabetesinNODmice．MetllodsFemale 4 of NODmiceat weeks divided agewere砌domly into ineach received咖 PBS(几=21)，pcDNA(n=20)，andhGAD65(n=21)目roups．Micegroup int珀瑚usclar of0．05mlPBS and DNAvaccineemulsifiedin0．05 injections alone，50“gpcDNA3．150¨g mlPBS7