2015药典无菌检查(常州培训).ppt

* 9.2 培养基适用性检查 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18 ～24h； 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上， 20～25℃培养24 ～48h，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌量小于100cfu菌悬液； 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上， 20～25℃培养5 ～ 7天，加入3～ 5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（V/V）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu孢子悬液；（如表9.3） 注：菌悬液在室温下2h使用,若保存在2 ～8 ℃可在24小时内使用。 * * * 9.3 培养基灵敏度检查 菌 种 接种培养基 培养温度℃ 培养时间 金黄色葡萄球菌 新鲜培养物至胰酪大豆胨液体基或胰酪大豆胨琼脂基上 30～35 18～24h 铜绿假单孢菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中 白色念珠菌 新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上 20～25 24～48h 黑曲霉 新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上 20～25 5～7d * 培养基灵敏度检查使用6株菌见下表 * * 9.4 培养基适用性检查 培养基接种 　　　　　　　　　　　　 金黄色葡萄球菌2支 硫乙醇酸盐流体培养基 铜绿假单胞菌2支 　 12ml（7支） 生孢梭菌2支 空白对照1支 分别接种小于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、生孢梭菌 菌悬液各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3天，逐日观察结果。 * * * 9.5培养基适用性检查 培养基接种 　　　 枯草芽孢杆菌 2支 胰酪大豆胨液体基 白色念株菌 2支 9ml（7支） 黑曲霉 2支　　 　 　 　 空白对照1支 每分别接种小于100cfu枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5天，逐日观察结果。 * * * 9.6 培养基适用性检查 结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管试 验菌生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合 规定。 * * * 10. 方法适用性试验 试验目的: 1)进行无菌检查时，应进行方法适应性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查； 2)若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验； 3)方法适用性试验按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法确认。 * * * 10.1 方法适用性试验 菌种及菌液制备 ：除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌?、?枯草芽孢杆菌??、?生孢梭菌、?白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。 注：大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。 * * 10.2 方法适用性试验 薄膜过滤法 直接接种法 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu试验菌，过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3～5天。 各试验菌同法操作。 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基6管，分别接入小于l00cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体基6管，分别接入小于l00cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入规定量的供试品