1.2 基因工程的基本操作程序(第2课时).ppt

1.2基因工程的基本操作程序第2课时 学习目标： 1、了解基因工程操作的步骤 2、了解每步的方法特点 ②用__________切割目的基因，使其产生 。 ①用一定的 切割质粒，使其出现一个切口，产生_________。 (基因工程的核心) ③将切下的目的基因片段插入质粒的_____处，再加入适量__________，形成了一个重组DNA分子(重组质粒)。 限制酶 黏性末端 同种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 第二步 基因表达载体的构建 （一）构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。 （二）构建零件及其作用 ①目的基因 ②启动子 基因表达载体的组成 RNA聚合酶识别和结合的一段特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，RNA聚合酶与之结合才能驱动基因转录出mRNA，进而获得需要的蛋白质。 ③终止子 ④标记基因 一段特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端，作用是使转录在所需要的地方停止。 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化—— 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。 受体细胞 稳定 表达 第三步将目的基因导入受体细胞 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射法 感受态细胞法 将目的基因导入受体细胞 易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上 农杆菌特点： 农杆菌转化法 显微注射法 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因 动物 为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？ 显微 注射 分裂 分化 移 植 发育 2.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→_______细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 1.常用菌： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。 (检查是否成功) 分子水平检测 个体水平鉴定： ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 DNA分子杂交 分子杂交 抗原-抗体杂交 第四步目的基因的检测与鉴定 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单链的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。 分子杂交技术 1. 检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因： DNA分子杂交 提取受体生 物全部DNA 适当限制 酶切割 DNA片段 用同位素标记的 目的基因片段杂交 （表明目的基因已插入） 分子杂交技术 显出杂交带 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交 用同位素标记的 目的基因片段杂交 显出杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 提取受体生物的mRNA 抗原—抗体杂交 3.检测目的基因是否翻译出蛋白质： 提取受体生物的蛋白质 与相应抗体杂交 显出杂交带 （表明目的基因已形成蛋白质产品）