FAM64A基因对宫颈癌细胞周期调控的影响.PDF

山东医药 2013年第 53卷第 28期 FAM64A基因对宫颈癌细胞周期调控的 影响 徐 瑜 ，杜 刚 ，艾 青 ，兰 欢。 (1泸州医学院，四川泸州646000；2重庆医科大学) 摘要：目的 观察FAM64A基因对宫颈癌细胞周期调控的影响，探讨其作为分子靶点在肿瘤治疗中的潜在价 值。方法 阿霉素(ADR)处理HeLa细胞 ，半定量 RT—PCR方法检测 DNA损伤后 FAM64A表达水平的变化 ；胸腺 嘧啶脱氧核苷／诺考达唑阻断法将细胞阻断在 M期，并依次释放入 G、S、G2、M 期，半定量 RT—PCR方法检测 FAM64A在不同细胞周期中的表达情况 ；化学合成法合成特异性 的短链 siRNA，脂质体转染法将 siRNA分别导人 HeLa细胞，RT—PCR法检测其对 FAM64A表达的抑制效果；选取特异性的FAM64AsiRNA，转染入 HeLa细胞 ，采用 流式细胞仪分析FAM64A表达被抑制后对HeLa细胞周期的影响。结果 FAM64A的表达水平在 ADR处理后期 约24h呈现明显下调，到48h时表达量几乎为零。FAM64A的表达水平在 G：／M期表达升高，G 、S期表达降低。 半定量 RT—PCR结果表明，合成的特异性短链 FAM64AsiRNA能高效、特异性地抑制 HeLa细胞中FAM64A的表 达。流式细胞分析结果表明，FAM64A表达被抑制后，细胞周期被阻滞在 G，期。结论 FAM64A基因参与了宫颈 癌 HeLa细胞周期的表达和调控，是一个潜在的肿瘤治疗靶点。 关键词：子宫肿瘤；FAM64A基因；细胞周期；HeLa细胞 doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．28．003 中图分类号：R737．33 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2013)28-0009-04 lnfluenceofFAM64A geneonthecelIcycleregulationofcervicalcancer XUQiang，DU ，AIQing， ⅣHuan (1LuzhouMedicalCollege。Luzhou646000，P．R．China) Abstract：0bjective ToinvestigatetheeffectsofFAM64Aonthecellcycleregulationofcervicalcancercellline (HeLacells)andthetherapeuticpotentialofFAM64Aagainstcancer．Methods ADRwasusedtotreatHeLacellsand RT．PCR wasusedtochecktheexpressionchangesofFAM64A afterDNA damage．Thymidine／Nocodazoleblockmethod wasusedtoblockthecellcycleinM—phase，andthengraduallythecellcyclecameintoG1，S，G2andM phaseswithtime goingby，andRT—PCR wasusedtodetecttheexpressionchangesofFAM64Aindifferentcellcyclephases．Threesmallin— terferingRNAs(siRNA)wereconstructedandusedtospecificallydepleteFAMCMAinHeLacells．RT—PCRwasusedto detecttheinhibitoryeffectofsiRNA againstFAM64A．TheeffectsofFAM64A depletiononthecellcycleofHeLacells weredeterminedbyflow cytometry．Results FAM64A expression levelwassignificantlydecreasedat24 h afterADR treatmentna dalmostzeroat48h．FAM64A showedahigherexpressionlevelduringG2／M phaseandlowerexpressionlev— elsduringGlnad Sphases