MM_FS_CNJ_0153出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法.doc
MM_FS_CNJ_0153出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌微生物法
MM_FS_CNJ_0153
出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法
1.适用范围
本方法适用于出口冷冻和生鲜的猪肉、猪舌、鸡肉、虾和虾仁中耶氏菌检验，其他食品可参照使用。
磷酸氢二钠
8.23g；
磷酸二氢钠(含1个结晶水)
1.20g；
氯化钠
5.00g；
山梨醇
10.00g；
胆盐(3号)
1.50g；
蒸馏水
1000mL；
将前三种成分溶于水中，再加入后两种成分，溶解后调至pH7.6，分装于500mL广口玻璃瓶内，每瓶225mL，高压灭菌121℃15min。
2.2.改良的酵母浸汁孟加拉红肉汤(modifiedyeastextractrosebengalbroth)
磷酸二氢钾
0.508g；
磷酸氢二钠
11.21g；
酵母浸汁
5.00g；
氯化钠
1.00g；
硫酸镁(含7个结晶水)
0.01g；
蒸馏水
770mL；
将上述各成分溶于蒸馏水中，加热使之完全溶解，调至pH8.0，121℃高压灭菌15min。
2.2.2.40g/L山梨糖水溶液：100.00mL。
2.2.3.10g/L丙酮酸钠水溶液：100.00mL。
2.2.4.4g/L孟加拉红水溶液：10.00mL。
2.2.2，2.2.3溶液流通蒸汽加热0.5h灭菌，2.2.4溶液过滤除菌，将灭菌过的此三种溶液加到灭菌、冷却的基础液中，调至最终pH为8.0，以无菌操作分装于18mm×180mm灭菌的试管中，每管8mL，4℃冰箱保存备用。
蛋白胨
12.00g；
月示蛋白胨(proteosepeptone)
3.00g；
乳糖
10.00g；
胆盐(3号)
1.50g；
氯化钠
5.00g；
吐温80(Tween80)
10.00g；
氯化钙(无水)
0.20g；
中性红
0.03g；
结晶紫
0.001g；
琼脂
18.00g；
蒸馏水
1000mL；
±0.2，再加入指示剂，混匀后121℃高压灭菌15min，待冷至50～55℃时，立即倾注于灭菌平皿内，每皿约15mL，制成的琼脂平板呈淡橙色。
牛肉膏
5.00g；
蛋白胨
10.00g；
葡萄糖
5.00g；
氯化钠
5.00g；
吐温80(Tween80)
10.00g；
氯化钙(无水)
0.20g；
琼脂
20.00g；
蒸馏水
1000mL；
2.4.2.1.溶解200g无水亚硫酸钠于1000mL蒸馏水中，配成200g/L水溶液。
2.4.2.2.溶解50g枸橼酸铋铵于500mL蒸馏水中，配成100g/L水溶液，加1mL浓的氢氧化铵，放置至澄清，可能还需再加数毫升氢氧化铵。加此溶液于2.4.2.1溶液中并混合之。
2.4.2.3.加100g无水磷酸氢二钠并混合之。
2.4.2.4.加10g枸橼酸铁铵于100mL蒸馏水中，配成100g/L水溶液。并将此液加入上述的2.4.2.1、2.4.2.2、2.4.2.3的混合液中。
将混合液于100℃加热2min或3min，用橡皮塞塞瓶，储存于室温暗处，不可放于冰箱内。
℃灭菌15min并冷至70℃左右的基础液中，彻底摇匀，再加4mL10g/L煌渌水溶液，混匀，待冷至50℃左右时倾注平皿。制成的平板应为淡乳黄色、不透明，存放于室温暗处或冰箱内，以临用前一天制备为宜。
牛肉膏
3.00g；
酵母膏
3.00g；
蛋白胨
15.00g；
月示蛋白胨
5.00g；
山梨醇
20.00g；
葡萄糖
1.00g；
硫酸亚铁
0.20g；
氯化钠
5.00g；
硫代硫酸钠
0.30g；
酚红
0.024g；
琼脂
15.00g；
蒸馏水
1000mL；
±0.2，然后加入酚红，分装于13mm×130mm试管，121℃高压灭菌15min，待冷至50℃左右，斜置成深高层斜面。制成的培养基为淡橙红色。
培养基采用高层穿刺、斜面密布划线接种法。25℃培养24±2h。观察结果：小肠结肠炎耶尔森氏菌的反应为底层斜面均产酸、变黄色、无硫化氢、不产气(偶有少量小气泡)。
2.6rustigian氏尿素酶试验培养基(改良法)
酵母浸汁
0.10g；
磷酸二氢钾
0.091g；
磷酸氢二钠(无水)
0.095g；
酚红
0.01g；
蒸馏水
900mL；
高压灭菌121℃15min
尿素
20.00g；
蒸馏水
100.00g；
过滤除菌
2.6.3.将上述两液混合，分装于10mm×100mm的灭菌试管中，每管约1mL左右。制成的培养基为淡橙黄色，尿素酶反应阳性者培养基由淡橙黄色变为桃红色，阴性者颜色不变。
2.7.鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶试验培养基
蛋白胨
5.00g；
牛肉膏
5.00g；
溴甲酚紫(16g/L)